江门陈主任
如题,一直跑3个目标蛋白,其中两个都很稳定,趋势符合预期,其中一个分子量62kd,一直不稳定,多次会出现哑铃状黏连以至于填满泳道外区域,请问是因为所使用的的PVDF膜是0.22μm的原因吗?在园子里的说法是只有小于20KD的才用0.22μm,否则应该用0.45μm?转膜条件:湿转,冰水浴,恒流200mA,1.5h
秋秋欣欣
出现哑铃状的结果图最可能是你胶的问题,0.22的膜转62的蛋白完全没有问题
bamboopiggy
0.2 μm适用于蛋白质测序和低分子量蛋白的免疫印迹。它有着更高的蛋白质结合能力以及比0.45 μm膜更高的截留率。0.45 μm是为荧光免疫检测而开发的。它在多种激发和发射波长范围内的荧光背景都极低。随着膜孔径的不断减小,膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。但是膜孔径如果小于0.1mm,蛋白的转移就很难进行了。0.2um孔径小,对小分子蛋白有较好的拦截吸附,背景可能会比前者稍高。
Eason老歌迷
我们遇到过这种情况。也是相同的蛋白大小区域。我建议你可以试试换个浓度的胶跑,看看效果
天一湖医者
会有影响,大于20kD的蛋白可用0.45μm的膜,小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜了,蛋白分子量62-21kd如用0.22μm的膜就会发生Blowthrough的现象。
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