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科研学霸天团,48小时有问必答
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RIP实验Input RNA降解严重
毛利小五郎的徒弟
增加rna的上样量,然后加入非特异性裂解酶减少裂解。
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问
miR-155 mimics NC 组、miR-155 inhibitorNC 组,用的试剂有什么不一样吗?
毛利小五郎的徒弟
二者虽然都是阴性对照,但是两者没有关系,试剂需与阳性组保持一致。
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问
科研求助:有关MiRNA-155的科研设计,特别是关于阴性对照组。
毛利小五郎的徒弟
一组是加mirna155,一组是mirna155加生理盐水
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问
体内干扰实验求助
毛利小五郎的徒弟
最好是原代细胞系,没有的话可以用sy5y细胞代替
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问
RNA测序P值矫正之后差异基因太少了怎么办?
毛利小五郎的徒弟
你做p值矫正的时候适当放开一下矫正区间试一下
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问
RNA杂交缓冲液(无甲酰胺)100ml的具体配方是什么?
Piccccbo
每个厂家的缓冲液配比都是不同的,但物质构成都是一样,一般是由PIPES、EDTA、氯化钠、去离子甲酰胺等组成。
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问
miRNA测序问题
Piccccbo
确实比较高,一般认为rRNA含量低于15%为正常。建议检查一下样本是否有污染,然后用工具进行序列比对一下,不行就得重新测序
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问
【求教】小鼠巩膜RNA提取
juyue2010
使用磁珠提取,损失减少。一张巩膜就可以了
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问
求助:Elisa试剂盒的批间差如何执行?
huarenqiang5
批间差:选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定,每个样本使用同一试剂盒重复测定8次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。批间差: CV<13%
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问
hsa-miRNA是人的miRNA,那has-miRNA呢?
毛利小五郎的徒弟
has-miRNA是指小鼠的mirna
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问
求助 | 一管22nt的单链RNA溶液,刚发现被别人反复冻融了很多次,这个还能用吗?
huarenqiang5
这个不能用了,不然会导致结果有误差。
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问
RNA浓度换算
毛利小五郎的徒弟
ng/ml与mmol/l换算:ng/ml的结果×3.12即可换算成nmol/l。
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问
sgRNA设计相关
huarenqiang5
病毒基因组在进入宿主细胞之后,可以视为宿主细胞的一部分
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问
提取的RNA跑胶有四条带,这是因为什么呀,这样还能做qpcr吗?求大神帮忙分析一下
毛利小五郎的徒弟
可能是因为rna之间的局部缠绕,不影响的。
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问
判断mRNA完整性问题
bernipan
评估总RNA完整性的常用的方法是使用少量的RNA样品进行变性凝胶电泳并用溴化乙锭(EtBr)进行染色。虽然使用非变性凝胶电泳也是可以的,但其结果可能较难解读。RNA的二级结构会改变其在非变性凝胶中的迁移模式,从而使RNA不会按真实片段大小进行迁移。非变性环境同样会使条带不那么清晰,甚至会产生多条带分别对应于同一种RNA的不同结构。完整的总RNA在进行变性凝胶电泳时会产生清晰的28S和18S rRN
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问
请问一下写了一篇心肌梗死合并糖尿病病例报道发表哪个杂志好些?
徐彩云6
可以投《中华心血管病杂志》试一下
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问
求助,rna完整性
huarenqiang5
你rna没有降解,你目前的这个情况属于正常
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问
请问细菌基因组三代测序提DNA有什么注意的点吗?
huarenqiang5
离心柱漂洗完成后,尽可能烘干柱膜上残留乙醇,残留乙醇会影响洗脱效率和下游实验效果;如果A260/230值过低,说明样本提取过程中,漂洗不彻底,有盐离子残留,建议增加漂洗次数; 对于基因组DNA提取,A260/280值如果低于1.7说明有可能存在蛋白污染,如果值大于1.9,说明可能存在RNA污染;如果洗脱样本时没有使用BufferEB,而使用ddH20,比值或偏低,因为P
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问
试剂盒中的巯基乙醇可以换成别的试剂吗?巯基乙醇实在是太难闻了,😭😭,如果可以,可以换成哪些试剂呢
balalaLy
试剂盒的试剂就尽量不要换了,如果不是试剂盒还可以选没有气味的trizol。不过试剂没有气味也不一定无毒,有气味还能警示一下。可以拿到安全柜里边操作。
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问
关于LncRNA的ChIRP实验的问题,走过路过看一看,感谢感谢
huarenqiang5
大多数都是用试剂盒,这样节约时间等,同时也可以减少误差
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