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进行膜蛋白的共免疫沉淀(Co-IP)实验时,选择合适的裂解液配方是非常重要的。裂解液的成分应该能够充分裂解细胞膜,并保持目标蛋白质的稳定性和功能。以下是一种常用的裂解液配方,供参考:
1. 缓冲液:选择适当的缓冲液,如磷酸盐缓冲液(PBS)或甘氨酸盐缓冲液(Tris-Glycine),pH值根据实验需求选择合适的范围。
2. 蛋白酶抑制剂:添加蛋白酶抑制剂,如苯甲砜(PMSF)、氨基甲酸甲酯(AMBN)或酚甲砜(PCMB),以防止蛋白质的降解。
3. 盐类和离子强度调节剂:根据需要添加适量的盐类(如NaCl、KCl)和离子强度调节剂(如甘氨酸、PEG)来优化细胞膜的溶解和蛋白质的稳定性。
4. 非离子性洗涤剂:为了裂解细胞膜,添加适量的非离子性洗涤剂,如Triton X-100、NP-40、Tween-20等,以促进膜蛋白的释放。
5. 高速离心:使用高速离心步骤来除去细胞碎片和细胞核等非溶解物质。
请注意,不同的膜蛋白可能对裂解液配方有不同的要求,具体的配方和浓度应根据你所研究的膜蛋白的特性和文献报道进行优化。此外,还应该根据实验的具体目的选择合适的抗体和免疫沉淀条件。
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主要成分为50mM Tris (pH7.4),150mM NaCl,1% NP-40, 0.1% SDS。
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我们一般用成品的,效果还不错的
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