求石蜡切片提取RNA的方法

石蜡切片提取rna步骤：

1. 请自行准备：无水乙醇、生理盐水、二甲苯及无RNA酶1.5mL离心管。

2. 取出析出液和洗涤液，按以下操作：a) 析出液：4.5mL加入25.5mL无水乙醇，混匀；9mL加入51mL无水乙醇，混匀。

b) 洗涤液：9mL加入21mL无水乙醇，混匀；18mL加入42mL无水乙醇，混匀。

c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。

3. 样本处理：a) 取5-8 μm 厚石蜡切片5-10张，60℃放置5分钟，放入装有二甲苯的玻璃瓶中，浸泡10分钟后，用手术刀或刀片，将组织刮下，放入1.5 mL离心管。也可将石蜡切片60℃放置5分钟后，直接放入含1.2 mL二甲苯的1.5 mL离心管，震荡脱蜡10分钟，12,000 rpm室温离心2 min，弃上清。 b）石蜡块：手术刀刮取20-30 mg石蜡包埋组织样本（尽量去除石蜡部分），放入1.5 mL离心管，加入1 .2mL二甲苯，震荡脱蜡10分钟，12,000 rpm室温离心2 min，弃上清。

4. 在上述处理过的脱蜡样本管中加入1.2 mL 无水乙醇，旋涡震荡30 秒，12,000 rpm 离心 2分钟，弃上清（注意不要倒掉沉淀，少量乙醇可用吸水纸吸去，未包蜡样本不需此步）。

5. 开盖，室温放置5分钟，去除残留无水乙醇。

6. 加入100 μL生理盐水，震荡混匀20秒；加入200 μL裂解液，20μL消化液A，振荡混匀，室温放置5分钟。

7. 加入20 μL消化液B，震荡混匀，56℃水浴90分钟至组织完全消化裂解。（最好消化至溶液中无组织碎片，皮肤、肺脏、子宫等结缔组织较多的切片应适当延长消化时间。）

8. 加入500μL析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。

9. 将吸附柱放入收集管内，将混合物吸入吸附柱内，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，弃收集管内废液。

10. 将吸附柱放回收集管内，加500 μL洗涤液至吸附柱内，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，弃收集管内废液。

11. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm离心2分钟，离去残留的洗涤液。

12. 取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入50-100 μL 洗脱液，静置3分钟，12,000 rpm 4℃离心2分钟，收集RNA溶液。提取的RNA即可用于下一步实验或-70℃保存。

以下是石蜡切片提取RNA的方法：

材料：

RNase AWAY或其他RNase去除剂

DEPC水

70％乙醇

石蜡切片

无菌镊子

1.5 ml离心管

RNase-free聚丙烯酰胺凝胶

RNase-free试剂盒（例如，Qiagen RNeasy Mini Kit）

步骤：

使用RNase AWAY或其他RNase去除剂将刀片和所有工具清洗干净，以避免RNA的降解。

在DEPC水中漂洗石蜡切片，去除石蜡。重复2-3次。

将石蜡切片用无菌镊子移动到一个1.5 ml离心管中。

加入200-300 μl的DEPC水，加热至95℃，使石蜡切片融化。

加入等体积（200-300 μl）的苯酚/氯仿混合液，摇晃离心管混合10-15秒，离心3-5分钟，将上清移至新的离心管中。

加入1体积（200-300 μl）70％乙醇，混合离心，离心3-5分钟，将上清倒掉。

空气干燥石蜡切片，然后将其放置于RNase-free聚丙烯酰胺凝胶上。

加入适量的RNA提取试剂（例如，Qiagen RNeasy Mini Kit），按照试剂盒说明书提取RNA。

注意事项：

所有材料和工具都应为RNase-free。

加热过程应该快速，以防RNA降解。

RNA提取试剂的种类和用量应根据实验要求而定。

石蜡切片提取RNA的方法可以使用以下步骤：

1. 用去离子水去除石蜡切片上的油脂和蜡质。
2. 用乙醇或异丙醇洗涤石蜡切片，以去除残留的油脂和蜡质。
3. 用异丙醇或乙醇再次洗涤石蜡切片，以去除残留的乙醇或异丙醇。
4. 在石蜡切片上加入蛋白酶K和SDS，使其在60℃下消化30分钟。
5. 加入异丙醇或乙醇，使RNA沉淀。
6. 用70%的乙醇洗涤RNA沉淀。
7. 用DEPC水溶解RNA。