CTAB法提取RNA

CTAB提RNA步骤：

1.取1.5ml的离心管加入1ml预热的CTAB缓冲液(亚精胺)(65度),加20ul(β-巯基乙醇)。

2.取材料研磨加入1.5ml的离心管中65度,10min(15min)加热,期间多次震动,摇匀。

3.取上清至另一1.5ml加入等体积氯仿异戊醇(24:1)振荡摇匀,4度,12000rpm,10min离心,取上清至另一1.5ml的离心管中。

4.重复一次。取上清至1.5ml的离心管中加1/4体积10mol/LLiCl,下20度沉淀6h度,12000rpm,20min或30min弃上清。

CTAB法提取RNA的步骤如下：

样品的制备：将待提取RNA的样品加入离心管中，加入RNase-free PBS洗涤1-2次，去除表面的细胞碎片和其他污染物，离心收集样品。

细胞破裂：加入细胞裂解液(Tris-HCl pH 7.5, 100 mM; EDTA pH 8.0, 10 mM; NaCl, 1 M; SDS, 1%)，混匀后孵育于65℃水浴中10-15分钟，直到细胞彻底裂解。

酚/氯仿抽提：加入等体积的酚/氯仿(25:24)混合液，混匀后离心，将上清液转移到新离心管中。

RNA沉淀：加入等体积的异丙醇，轻轻摇晃管子使其混合，离心收集RNA沉淀物，将异丙醇去除。

RNA清洗：加入75%的乙醇，离心去除，去除乙醇后将RNA干燥，再溶解于DEPC水中即可。

需要注意的是，RNA的提取需要采取一系列严格的操作措施，如穿戴手套、使用RNAase-free试剂、操作时不要出现摇晃等操作，以避免RNA的降解和污染，从而保证提取到高质量的RNA。