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科研学霸天团,48小时有问必答
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做土壤微生物的,需要定量检测土壤中某一真菌的生物量。
loveliufudan
可以通过设计特异性引物并使用qPCR技术来定量检测特定真菌的DNA含量,从而推测其生物量。具体的实验步骤大概如下:首先需要收集士土样品,将其进行粉碎和筛选,以获得较为均匀的样品。提取士土样品中的真菌DNA,可以采用商用的DNA提取试剂盒或自制方法。设计特异性引物,需要通过生物信息学方法从已知真菌的基因序列中筛选出比较保守的区域,并进行引物设计和验证。进行qPCR反应,将提取到的真菌DNA和特异性引
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定点突变之后同源重组完毕,电泳显示有条带,为什么转化后的板子不长菌落
sswei
转化的时候有误,可以重新实验。目的基因和载体都切开,特别是目的基因如果是PCR后直接酶切效率会较低;载体上两个酶切位点连在一起,感受态的效率问题,转化过程对不对,如抗生素加的对不对。
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qpcr结果分析求问
dxy_t3td6v30
样品没问题,可能是引物扩增效率不行,或者循环数不对。
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问
想要做细菌的定量pcr,细菌常用的内参是什么
loveliufudan
在细菌定量PCR实验中,常用的内参包括:16S rRNA基因:这是一种高度保守的基因,在细菌中广泛存在。在细菌中,16S rRNA基因的序列差异很大,因此需要根据目标细菌的种类选择合适的引物和探针。rpoB基因:这是一种编码细菌RNA聚合酶的亚基的基因,也是一种广泛存在且高度保守的基因。gyrB基因:这是一种编码细菌DNA旋转酶亚基的基因,也是一种常用的内参。
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问
以昆虫cDNA为模板进行PCR无法克隆目的片段
桃之zbx
有可能DNA浓度过低,有没有测过DNA浓度呀酶有没有把目的片段切碎呀PCR的温度和时间调整一下直接送公司测一代看看能不能测出来,反馈结果是什么
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问
挑阳性克隆进行扩繁提质粒跑电泳。请教为什么质粒的条带与质粒大小条带不一致。用的10000的marker,但质粒大小为7500bp
loveliufudan
如果你用的是10000的marker,但质粒大小为7500bp,可能是marker大小和实际质粒大小不匹配导致的。建议选择大小适当的marker,并根据实际质粒大小进行优化和调整,以确保结果的准确性。
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cDNA跑PCR跑不出条带怎么办呀
橙汁儿青柠味
首先确定引物是否正确,其次调整pcr条件,如增加模板量,降低退火温度等等
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问
想要通过荧光定量pcr来检测粪便,组织中的细菌的量,可以用DNA做吗?需要内参吗?如果不需要为什么不需要?怎么做数据处理
loveliufudan
可以使用荧光定量PCR来检测粪便、组织中的细菌量,而DNA是进行PCR的重要基础。通常情况下,荧光定量PCR需要使用内参来校正PCR反应的变化,以确保可靠的定量。内参通常是一个稳定的基因,在样本中的表达量相对稳定,且与待检测的靶基因有相似的扩增效率。使用内参可以帮助纠正PCR反应的波动,使得PCR反应更加准确可靠。然而,在一些特殊情况下,如粪便等样本中可能存在许多抑制性物质,这些物质可能会干扰PC
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各位大佬 帮帮忙🥺 第一张是DNA的电泳图 第二张是PCR后的 为什么条带那么拖 而且第二张最后一个是水 为什么也P出来了呀?
橙汁儿青柠味
条带拖尾表明不纯存在杂志,水也能pcr出来,表明系统中存在污染,但如果分子量很小可能是引物二聚体
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问
做qPCR,ct值为35,有参考意义吗?
dangaozhanghui
通常情况下是没有意义的,这种基本判定为不表达。但也要具体情况具体分析,因为有些特殊的检测,需要对照试剂盒给出的参考范围,进行判断(●°u°●)」
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问
PCR结果和生信结果相反
毛利小五郎的徒弟
可能是生信验证几乎覆盖基因的外显子区域,因此获得的基因表达量实际上综合考虑了该基因所有外显子区域的表达水平。而qCPR的定量是在局部区域设计引物并扩增,并不会考虑到基因全长。就会导致两种检测结果不一致的情况,这时建议把基因的外显子去掉,就可以避免得到相反结果
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2个ntc有扩增曲线和熔解曲线,另外一个没有,正常吗,原因是什么,解决方法是什么
loveliufudan
如果您的样品中的两个NTC都显示了扩增曲线和熔解曲线,而另一个NTC没有,那么可能有以下原因:该NTC的PCR反应可能失败了,没有扩增出任何产物,导致没有曲线。这可能是由于技术问题,如引物或探针的失效、反应体系中的污染物等导致的。该NTC可能含有低水平的污染物,但是污染物的浓度过低,不能产生扩增曲线或熔解曲线。
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大肠杆菌逆转录可以使用oligoDT吗,我的表达基因上有连续的a,能否使用oligoDT,然后做qpcr
汤姆卜丽波
可以做的,能p出来,只要有一点表达都能p出来
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qPCR内参Ct值
橙汁儿青柠味
模板cDNA稀释的比较多所以内参的ct值比较大,然后目的基因的表达丰度比较高,所以ct值比内参小
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问
设计扩cDNA的引物是否需要去内含子?如何找到一段DNA序列的内含子?
loveliufudan
设计扩增cDNA的引物时,是否需要包括内含子取决于您想要扩增的片段是否跨越了内含子区域。如果您想要扩增的片段跨越了内含子,那么您需要设计跨越内含子的引物。如果您想要扩增的片段不跨越内含子,那么您可以设计内含子保留的引物,这样可以减少设计引物的难度和复杂性。找到一段DNA序列的内含子,可以尝试以下几种方法:基于已知转录本的查询:如果您的实验物种已经有已知的转录本序列,您可以使用在线工具或者本地软件,
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问
RNA反转录之后的cDNA跑胶该选择多大的marker?
loveliufudan
一般而言,可以根据已知目标基因的长度来选择 Marker 的大小。如果你希望检测的目标 DNA 片段在 100bp-1000bp 左右,则建议选择 100bp DNA ladder 或者 1kb DNA ladder 作为 Marker。如果你希望检测的目标 DNA 片段比较小,则可以选择 50bp DNA ladder 作为 Marker。因此,选择合适大小的 Marker,能够更好地检测出期望
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问
分子互作求教
loveliufudan
如果您使用Octet BLI测定蛋白质相互作用,您可以获得响应图谱,但无法获得类似ELISA那样的结合曲线。不过,通过对响应图谱进行分析,如计算最大响应值、关联常数(Kd)等,您仍然可以评估蛋白质相互作用的强度和特异性。
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trizol法怎么提取血中rna?
Dr_劉医生
以下是Trizol法提取血液RNA的步骤:提取血液细胞2. 加入0.2ml氯仿,振荡15s,静置2min。3. 4℃离心,12000g×15min,取上清。4. 加入0.5ml异丙醇,将管中液体轻轻混匀,室温静置10min。5. 4℃离心,12000g×10min,弃上清。6. 加入1ml 75%乙醇,轻轻洗涤沉淀。4℃,7500g×5min,弃上清。7. 晾干,加入适量的DEPC H2O溶解(6
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问
微流控制备双层液滴有什么要点吗?
loveliufudan
以下是一些建议和注意事项,供您参考:1.毛细管的尖端距离:尖端距离需要适中,以保持液滴的稳定性并防止两个液滴之间的过早融合。通常,根据实验液相的流速和流动性,尖端距离可以在0.5至3 mm之间进行调整。建议先使用较大的距离开始尝试,并在实验中逐步调整以获得最佳结果。2.调整流速:在进行液滴制备时,内外相和中间相的流速会影响液滴的形成。请确保内相和外相的流速适中,以使液滴能够在毛细管尖端正常形成。您
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问
用人血做pcr,是用血浆还是全血还是血清比较好呢?
汤姆卜丽波
我们一般都是用血清做的,直接采血然后取血清
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