trizol法怎么提取血中rna？

trizol提取rna步骤：

以下是Trizol法提取血液RNA的步骤：

1. 提取血液细胞

2. 加入0.2ml氯仿，振荡15s，静置2min。

3. 4℃离心，12000g×15min，取上清。

4. 加入0.5ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min。

5. 4℃离心，12000g×10min，弃上清。

6. 加入1ml 75%乙醇，轻轻洗涤沉淀。4℃，7500g×5min，弃上清。

7. 晾干，加入适量的DEPC H2O溶解（65℃促溶10-15min）

使用TRIzol法提取血液中的RNA需要经过几个关键步骤。以下是简要的操作步骤：

1.采集血样：

首先，采集足够数量的血液样本。常见的体积是200至500微升，但实际需要根据实验目的和设计调整。

2.混合与溶解红细胞：

将血液样本加入到等体积的红细胞溶解液中（例如，10倍稀释的红细胞溶解液），充分混匀。静置5-10分钟，以使红细胞充分破裂和溶解。这一步是为了去除红细胞中的大量蛋白质和其他污染物。

3.离心：

将混合物离心（约300-400 x g，4°C，5-10分钟），收集上清液中的白细胞。弃去下层的红细胞沉淀。

4.洗涤与离心：

向收集到的白细胞上清液中加入等体积的PBS，充分混匀。再次离心（约300-400 x g，4°C，5-10分钟），弃去上清液，留下白细胞沉淀。

5.TRIzol裂解：

向白细胞沉淀中加入适量的TRIzol试剂（通常每100μL血液加入1mL TRIzol），充分混匀，使细胞充分裂解，释放RNA。静置5-10分钟，以确保充分裂解。

6.混合与分层：

向TRIzol裂解液中加入1/5体积的氯仿，充分混匀，然后静置2-3分钟。离心（约12,000 x g，4°C，15分钟），使混合物分为3层：上层是水相，中层是白色的蛋白质相，下层是有机相。

7.RNA沉淀：

转移上层水相到新的离心管中，避免触及中间相。向上层水相中加入等体积的异丙醇（或2.5倍体积的无水乙醇），充分混匀，使RNA沉淀。静置10-20分钟，以确保充分沉淀。

8.离心与洗涤：

将混合物离心（约12,000 x g，4°C，10-15分钟），以收集沉淀的RNA。