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trizol法提取血中的RNA,怎样做量会更多?

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问:trizol法提取血中的RNA,怎样做量会更多?提完RNA加DEPC水后放-80度也会容易讲解吗?


答:


1 血要新鲜。如果是冻存的,在解冻时要完全,之后再加Trizol。


2 可以稍多加一些Trizol,少加些血。混匀之后放置10分钟左右,直接加三氯甲烷,混匀再去离心。


可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷。


3 每个步骤操作要快,用的时间药短些,防止降解.


4 异丙醇沉淀的时候,放-20°C的冰箱半个小时,或再适当延长一点时间。迅速离心,之后加75%乙醇。只洗一遍,洗2遍易损失部分RNA。


5 不要过分干燥,管内稍有点残余的乙醇也没关系。干燥一会就迅速加DEPC水少量。一般我都加的30.如果需要浓度高点可以少加水。


6 提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存。


RNA直接冻存会降解。也会影响以后反转的效率。

(责任编辑:大汉昆仑王)

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