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Trizol 试剂提取法

相关实验:动物 RNA 提取实验

最新修订时间:

原理

Trizol 试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和 SDS 的单相酸性溶液,其在裂解细胞的同时抑制 RNase 的活性,随后加入氯仿,酚会大量的溶解在氯仿中。由于 DNA 和 RNA 在酸性酚中的溶解性不同,造成 DNA 分布在下层的氯仿酚溶液中,RNA 则分布在上层的水相中,最后用异丙醇沉淀水相中的 RNA,并用 70% 乙醇洗涤沉淀,这样就可以得到比较纯净的总 RNA。

材料与仪器

动物组织、液氮、Trizol 试剂;

步骤

1、 先在研钵中加入液氮,再将组织剪成小块在液氮中磨成粉末,用液氮预冷的药匙取 50-100 mg 组织粉末加入已盛有 1 ml 的 Trizol 液的 EP 管中(注意组织粉末总体积不能超过所用 Trizol 体积的 10%),充分混合均匀。
 
2、室温放置 5 min,然后加入 200 μl 的氯仿,盖紧 EP 管并剧烈摇荡 15 秒钟。
 
3、12, 000 rpm 离心 10 min,取上层水相于一新的 EP 管中(千万不要将中间的沉淀层和下层液混入,否则重新离心分离),加入 500 ul 异丙醇,温和颠倒混匀。室温放置 10 min,12, 000 rpm 离心 10 min。
 
4、小心地弃去上清液,加入 1 ml 的 75% 乙醇,涡旋混匀,4℃ 下 12, 000 rpm 离心 5 min。重复操作一次。
 
5、弃去上清液(尽量将残余液体除去),室温或真空干燥 5-10 min(注意不要干燥过分,否则会降低 RNA 的溶解度)。用 30 ul DEPC 处理过的水将 RNA 溶解,必要时可 55℃-60℃ 水浴 10 min。RNA 可进行 mRNA 分离,或贮存于 70% 乙醇并保存于 -70℃。
 
 

来源:丁香实验

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