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以下是Trizol法提取外泌体RNA的步骤:
收集外泌体:用离心或超声波等方法收集培养基或生理液中的外泌体。建议在收集前,预先处理样品,如去除细胞残留物、碎片等。
加入Trizol:向外泌体悬液中加入 Trizol 试剂,建议加入试剂体积是悬液体积的 10% 到 20%。轻轻摇晃管子使 Trizol 均匀分散。
加入氯仿:加入氯仿等有机溶剂,摇晃离心管混合均匀。离心管在室温下放置5-10分钟,让混合物充分分层。
分离上清:用移液器取出上清液转移到新的离心管中。避免取到下层白色物质。
沉淀RNA:向上清液中加入异丙醇等制备缓冲液,使 RNA 沉淀。使试管上下翻滚混合。
洗涤沉淀:用酒精洗涤沉淀,再用 RNase-free 的乙醚洗涤沉淀,以除去氯仿等有机溶剂。
重悬RNA:向沉淀中加入 RNase-free 的水重悬 RNA。
质检RNA:通过 Nanodrop 或者 Agilent Bioanalyzer 等仪器检测 RNA 质量和浓度。
需要注意的是,在 Trizol 提取过程中,外泌体可能会受到损伤或者破裂,因此提取的 RNA 有可能来自于外泌体本身以及外泌体释放的 RNA,所以需要仔细处理样品,以确保提取的 RNA 来自于外泌体。
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