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外泌体知识宝典

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问我要用流式测外泌体上的蛋白marker,一定要用磁珠吗，有没有提供具体的步骤

土井挞克树

磁珠要用的步骤可以参考【1】具体而明确的检测　　【2】定量分析，荧光与外植体量之间有很好的相关性。　　【3】直接检测细胞培养上清液和生物液中的外泌体。无需分离或沉淀　　【4】需要的样品量非常少　　【5】灵敏度更高，动态范围更广。即使是少量的样品，也能保证检测结果。　　【6】可重复性　　【7】允许外泌体捕获细胞群的同时进行免疫表型分析

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问求助：有没有外泌体方面的大佬帮个忙，我想问下外泌体进入临床试验需要哪些前期实验。

汤姆卜丽波

至少要做完外泌体本身的分离鉴定，还要进行纯度和成分的检测，探究和疾病的关系，应用到动物实验

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问超离提取外泌体，粒径大大如何优化

Eason老歌迷

你可以试试一步法。一步法蔗糖垫缓冲超速离心方法能够获得更好的产量、细胞外囊泡完整性更佳和蛋白质污染物也更少。分离出的细胞外囊泡的大小、形态、产量和表面标记蛋白表达均能够被正常检测和表征。一步法则直接将蔗糖垫用于样品中细胞外囊泡的浓缩，即体液或细胞上清液直接添加于蔗糖垫之上，收集蔗糖垫使用PBS稀释后再次离心得到细胞外囊泡即可。去掉了预浓缩步骤，也减少了沉淀形成的次数。

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问外泌体做蛋白质组学需要去高丰度蛋白吗？

loveliufudan

对于外泌体样本进行蛋白质组学分析时，通常也需要去除高丰度蛋白。外泌体是一种细胞分泌的小囊泡，内含大量不同种类的蛋白质，其中某些蛋白质可能具有极高的丰度，这些高丰度蛋白可能会掩盖住外泌体中其它低丰度蛋白质的信号，影响蛋白质组学分析的准确性和可靠性。一般采用不同的富集方法去除外泌体中的高丰度蛋白，常用的方法包括尺寸排除层析、电泳、超速离心等。这些方法都是通过物理化学性质差异选择性地富集外泌体，同时剔除

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问Dil染外泌体步骤

土井挞克树

a）接种适量数目的细胞，37°C 培养过夜。b）去除培养基，离心收集细胞，加入 PBS 洗涤 2-3 次，每次 5 分钟。c）加入对应浓度 Dil 工作液 (5-10 μM)，室温孵育 30 分钟。d）400 g，4℃ 离心 3-4 分钟，弃去上清。再次加入 PBS 洗涤细胞 2-3 次，以充分去除未进入细胞内的Dilf）用无血清培养基或 PBS 重悬细胞后，在荧光显微镜或流式细胞仪下检测

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问请教trizol法提取外泌体RNA该如何弄。

loveliufudan

以下是Trizol法提取外泌体RNA的步骤：收集外泌体：用离心或超声波等方法收集培养基或生理液中的外泌体。建议在收集前，预先处理样品，如去除细胞残留物、碎片等。加入Trizol：向外泌体悬液中加入 Trizol 试剂，建议加入试剂体积是悬液体积的 10% 到 20%。轻轻摇晃管子使 Trizol 均匀分散。加入氯仿：加入氯仿等有机溶剂，摇晃离心管混合均匀。离心管在室温下放置5-10分钟，让混合物充

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问基质胶3D培养干细胞时，如何提取干细胞外泌体

huarenqiang5

操作步骤：1)采用含血清培养基培养干细胞，培养至一定时间；2)然后提取干细胞，将干细胞放置在不含血清的培养基中，培养至一定时间；3)将步骤2)中的不含血清培养基中的干细胞进行分离，对干细胞进行培养，将细胞培养后的培养基，离心去除杂质；4)将经过步骤3)中提取的外泌体提取液和含血清培养基液混合后进行培育，培育后得第一孵化液，对第一孵化液进行离心浓缩，得到含外泌体的浓缩液；5)通过设置将步骤4)中含外

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问外泌体新手求帮助

汤姆卜丽波

我们是冰盒直接放上复苏的，没影响

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问冻存久了的血清、血浆抽提外泌体做蛋白质组学有啥风险？

loveliufudan

长时间的冻存可能会影响血清、血浆中外泌体的完整性和数量，从而影响外泌体蛋白质组学研究的结果。一些研究表明，冻存时间越长，外泌体的完整性和数量会逐渐降低，从而可能导致假阴性或假阳性结果。此外，冻存的过程中也有可能引起蛋白质的降解和氧化，从而影响外泌体蛋白质组学的结果。因此，为了获得更准确和可靠的结果，最好尽可能在采集后立即进行外泌体的抽提和蛋白质组学分析，或者在短时间内将血清、血浆进行冷冻保存，同时

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问外泌体可以做蛋白质组学的哪些项目？

loveliufudan

外泌体是一种细胞分泌的小囊泡，内含有多种生物大分子，如蛋白质、核酸、脂质等。外泌体可以通过蛋白质组学等方法进行研究，从而发现新的生物标志物、治疗靶点等。常见的外泌体蛋白质组学研究项目包括：外泌体蛋白质鉴定：通过质谱等技术，鉴定外泌体中的蛋白质，包括高丰度蛋白质和低丰度蛋白质。蛋白质富集和分离：通过各种蛋白质富集和分离技术，如凝胶电泳、液相色谱等，对外泌体蛋白质进行分离和富集，以便于后续的分析和鉴定

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问【外泌体WB疑问】

illusio

2mL血清血浆提取出来的外泌体数量约undefined10的8次方至9次方，可以满足WB要求。可以找找其他原因

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问求助：外泌体提取

dxyc42u

红色胶状物不是外泌体，可能操作不当

3 回答584 围观

问请教各位作为标志物miRNA抽血清里的，外泌体里的，全血里的区别

genecreate

区别很大外泌体只是血液中很小的部分物质其包括的mi RNA种类少多了

3 回答538 围观

问外泌体体内体外实验的使用剂量

genecreate

细胞实验，终浓度10的9次方左右；动物实验要考虑动物大小体重

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问细胞层面怎么筛选出相关基因的外泌体？

juyue2010

细胞和它产生的外泌体同时做质谱，进行蛋白质组分析，或检测外泌体中的基因片段

2 回答390 围观

问提取外泌体，浓缩上清用多大的超滤管合适？

行而上学不行

超滤管的膜可以选择100KD.

3 回答2743 围观

问外泌体保存

天一湖医者

要验证血液外泌体里的目的基因，可以直接保存血液。

2 回答698 围观

问外泌体lncRNA，肿瘤组织中比正常组织中的lncRNA要表达低些，但是外泌体表达要高些

juyue2010

可能是肿瘤细胞将lncRNA通过外泌体排出细胞，完成细胞含量降低

2 回答350 围观

问wb检测，需要多少外泌体，颗粒数？

Eason老歌迷

外泌体是由细胞分泌而来的微小囊泡，直径约为30-200 nm，密度在1.13-1.21g/ml，具有杯状形态、双层膜结构。如果拿外泌体做wb，需要大概10的8次方个。

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问外泌体提取？提外泌体怎样才算的好？想请教大家一下。

府宅

WB检测可以发现样品中具有外泌体的标志物，可以一定程度上排除溶酶体、蛋白聚团、支原体等情。NTA粒径分析可以反应外泌体样品中粒子的群体特征，了解其纯度

3 回答677 围观

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