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之前咨询过相关产品技术人员,基质胶做胶上3D培养干细胞能否提取外泌体,技术人员也不确定,说基质胶存在粘性,存在可能会黏住外泌体的可能。请问有大佬做过基质胶3D干细胞培养后续提取外泌体吗?做过的话具体该怎么提取呢?怎么分离基质胶呢
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操作步骤:
1)采用含血清培养基培养干细胞,培养至一定时间;
2)然后提取干细胞,将干细胞放置在不含血清的培养基中,培养至一定时间;
3)将步骤2)中的不含血清培养基中的干细胞进行分离,对干细胞进行培养,将细胞培养后的培养基,离心去除杂质;
4)将经过步骤3)中提取的外泌体提取液和含血清培养基液混合后进行培育,培育后得第一孵化液,对第一孵化液进行离心浓缩,得到含外泌体的浓缩液;
5)通过设置将步骤4)中含外泌体的浓缩液加入无菌PBS溶解后加入外泌体提取液进行孵育,孵育后得第二孵化液,将第二孵化液进行离心收集底部沉淀,得细胞外泌体;
6)将步骤5)中收集的液体进行密度梯度离心,将提纯的液体通过收集管进行高纯度外泌体的收集;
7)冷冻储存,对培养后的干细胞外泌体进行深低温冷藏。
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将基质胶放在冰上溶解,在六孔板中用预冷的枪头加入1ml用dmem/f12培养基稀释的基质胶,随后孵育1h去除基质胶。
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基质胶作为一种三维细胞培养载体,确实存在着提取外泌体时可能会黏住外泌体的风险。不过,仍然有一些方法可以尝试提取外泌体,以下是一些可能可行的方法:
尝试使用非黏附胶:尝试使用不粘附的基质胶,例如聚乙二醇(PEG)等,这样可以减少外泌体黏附的可能性。
使用酶解方法:可以使用一些特定的酶来降解基质胶,释放出细胞和外泌体。例如,可以使用胰酶来降解基质胶,释放出细胞和外泌体。
离心法:首先,将培养基离心收集上清液,再使用超速离心法来沉淀外泌体。这种方法不需要对基质胶进行任何处理,但也有可能会同时沉淀一些基质胶。
染色体方法:可以使用一些特定的染色体来分离基质胶和外泌体。例如,可以使用聚乙烯醇(PVA)来封闭基质胶,再通过筛选膜分离外泌体。
总之,基质胶做胶上的3D细胞培养提取外泌体的方法目前并不十分成熟,需要尝试不同的方法,选择最适合自己实验的方法。同时,也需要进行必要的质量控制,确保提取出的外泌体质量可靠。
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