u5KRT
我是先用pbs1200rpm离心三遍,
再用胶原酶消化,消化是用的1mg/ml的I型胶原酶,37度190转消化了1小时
摇匀后1500转8分钟离心完是一坨组织,看不到什么沉淀
接着我用pbs1500转8分钟清洗了两次,我不死心还是吹打了下放在培养基养(如图),发现第二天这坨组织就会开始散开,第三天就只看得到一小部分了,但是看不到什么细胞,感觉全是脂滴。
我一开始只消化40分钟,发现出来的就是一坨,师姐说可能是酶有点失活,叫我消化久一点,结果延长了时间也是这样,师姐之前提的时候就是消化1小时顺利提出来了。
请问这坨是没消化完的组织吗?该怎么处理呢?是消化过度了还是仍然没消化好呢?(提了好多次了每次都是提四个多小时有点累了
huarenqiang5
你这个情况主要还是考虑没消化好。
土井挞克树
延长消化时间,你这个消化不彻底,或者更换消化酶
u5KRT
好的老师,请问消化好了是不是一坨能和培养基混在一起的沉淀,而不是现在这样的一坨
loveliufudan
根据您提供的描述和照片,可能是消化不充分导致的。建议可以尝试以下几点进行处理:
调整消化时间和胶原酶浓度:消化时间和胶原酶浓度可能需要进行调整,具体情况可以参考文献或者与其他实验室的同行交流。在消化时,可以尝试将消化液在细胞培养箱内进行消化,保证环境的恒温和恒湿。
加强摇匀:在消化过程中,需要不断的轻轻摇动或摇匀消化液,确保消化液均匀分布。
过筛:消化完后可以通过70 μm或者100 μm的滤网过筛,将组织碎片滤除。
试管内反复吹打:将消化完的组织碎片用移液管反复吹打,使其分散。
消毒:可以在取出的组织块用70%乙醇或紫外线灯进行消毒处理。
尽量避免机械震动:在离心过程中和移液管吹打组织时尽量避免机械震动,以免损伤细胞。
u5KRT
谢谢!原来消化完不能摇晃离心管,我每次消化完和pbs洗的时候都为了混匀用力摇晃,下次我注意,谢谢!
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