【求助】请问呀请问

笨人多作怪,刚开始试验周围没有师兄师姐的临床菜鸟,请原谅.
1,NCBI查到的基因序列应该是cDNA把,有什么办法能以图片或什么易理解的方式显示它在总DNA中占什么位置么?比如之间的intron之类.有文献提到一个叫GRAIL的软件,不过好像过时了,下不到.

2,那个cDNA有7k多长,翻译出的肽只900多,是因为翻译前剪切么,又有什么方法能看到cDNA里那些是coding区呢?

3,分离外周血T细胞,如果用FACS和磁珠各大概是什么花销呢,哪个网站都不写,又还没到打电话询价打扰家人的地步.

4,前辈们都什么时候开始动手实施了呀,要看多少篇文献到什么程度呢?自己看了文献,查了试验方法,还是不敢开始啊,发现还有这也没弄明白,那也没弄明白.5555555

前两个问题在tonynbee发的帖子里的资料中已经学习了~~
继续求教后两个问题...

第二问：
只要你弄清楚转录和翻译这两个概念就行了。生化我记得是大一或大二的课程。
cDNA(mRNA)是转录产物，肽（蛋白）是翻译的产物。所以，转录区（也就是cDNA）肯定不等于编码区（cds）。编码区才能被翻译成肽，是由ATG开始，到TAA，TGA结束。
而被转录，但却不被翻译的区域，分别叫5'UTR和3'UTR，
在NCBI中，你找到cDNA序列，然后其中有链接CDS，就是你想要的coding区。
第三问：不回答，多少数量以及什么内容都没讲，没办法说价格吧。或者去问公司吧。

第四问：看完帖后就可以动手了。文献不在乎多少。关键看你想做什么？
如果你有很多钱，你可以出idea，别人帮你设计实验，直至帮你做完实验，写好paper，呵呵

哎,被前辈开涮了:-(
现在我导师是那个有敏锐的idea,我来帮他做实验的人,可惜我离大一大二7年之久了,而且后来的训练重点根本不是科研,5555

其实我的实验思路巨简单,就是收集两个人群外周血,看T细胞里某转录因子的表达情况对比,入手就是mRNA的表达量,结果我发现这么看似简单一件事情里面却有无数我抓狂的陷阱.

至于这个转录子的上游和下游,那是我将来要抓狂的事情:-( 短短的6个月时间呀

用免疫磁珠吧，一个kit几千块钱，但能用几十次吧。平均每样100块，货到后2天搞定。
分离T细胞后，trizol法提RNA，成本10元／个。半天全部搞定
逆转录，成本5－10块钱／样，2小时搞定。
设计两对引物共120元。公司合成，3天搞定
做Real time，成本3块钱／孔，半天搞定目的基因和GAPDH，花1天分析RT结果。
按你的要求，两星期，全部能搞定了。
再做个western验证一下，一抗3K，二抗500,膜及其他的800.三天搞定。
再花2周写paper，花一周修改投稿。
一月后得到反馈，再花两周修改，再等一月接受。

所以，6个月，应该能出一篇SCI了。呵呵

Jesus~~~
又冒出好多我没想到的东西!!!特别是western及以后的事情~~~
:-)我要把这个文档存下来跟我那位不怒自威的lb谈,看来有希望不成仁.
:-(又出现新东西要学习了~~~我文献还没弄清楚呢,才学会看文献.

师姐答辩的时候,大佬们随便问个问题,师姐立刻说某杂志上某作者某年用某生物以某试剂浓度做出了以某数据为主的结果,估计我开题时就会被烤成那样.

谢谢前辈了,丁香园真是个圣殿!