间充质干细胞及其培养基

PromoCell MSC分化培养操作步骤

一、向神经细胞分化的操作流程

根据操作手册，用纤维连接蛋白（C-43050）包被合适的组织培养瓶。使用浓度为10μg/ml。

2、接种间充质干细胞
用MSC生长培养基（C-28010）在用纤维连接蛋白包被过的培养瓶中接种培养，接种密度为4000个/cm2。

3、培养间充质干细胞
将细胞培养至80%的饱和度，每48小时更换一次培养基。

4、诱导间充质干细胞
用MSCU经细胞分化培养基（C-28015）诱导培养，用MSC生长培养基（C-28010）培养剩余的一个样本作为阴性对照。

5、间充质干细胞的分化培养
至少培养3天，每48小时更换一次培养基。
注意：诱导后只要1天就观察到细胞显著的形态学变化。

6、收获和验证细胞
MSC来源的神经细胞可以选择性的根据的“神经细胞标记物的检测”来进-步验证细胞的特征。

二、向成骨分化的操作流程

在24组织培养板中用MSC生长培养基接种间充质干细胞，每接种6x104个MSC（接种密度为3.15x104个/cm2）。

2、间充质干细胞的生长
要点：让细胞达到≥100%的密度（24-72小时）。

3、诱导间充质干细胞
将其中一份培养的细胞用MSC成骨分化培养基诱导，另一份培养的细胞用 MSC生长培养基培养作为阴性对照。

4、间充质干细胞的分化培养
诱导培养14天，每3天更换一次培养基。操作时候小心不要破坏细胞的单层。

要点：在整个染色过程中不要让细胞在干的状态下放置超过30秒！

三、向成软骨分化的操作流程

要点：在整个染色过程中不要让细胞在干的状态下放置超过30秒！

五、MSC无分化生长的操作步骤

用人纤连蛋白溶液进行包被

将纤维连接蛋白用不含钙和镁的Dulbecco's PBS(C-40232)稀释至10μg/ml，用足量经稀释的纤连蛋白溶液覆盖组织培养皿的表面，以确保有效的包被整个培养表面。室温下将培养皿水平放置60分钟，确保覆盖整个表面后，吸出多余的纤连蛋白溶液后立即使用，或打开培养容器让其暴露在层流台上用气流吹干。已包被过的未使用容器可在4℃条件下最多保存2周。

按照原代细胞的培养手册进行解冻培养。

PromoCell MSC DXF培养墓的主要特点：

1、适用于骨髓/脐带/脂肪来源的MSC

2、在更短的培养时间内细胞扩增更多

3、细胞倍增速度更快

4、作简便，基础培养补充剂一次性混合后，即可实现培养

5、更低的接种密度，4000个细胞/cm2

6、在细胞传代的整个过程中，都可持免疫表型、多能性及对T细胞的抑制能

7、无血清、无动物源性，成分已知

优点：

1、精确控制MSC的类型，自我增殖或定向分化

2、更低的使用成本

3、降低了污染风险

5、简化注册申报过程

6、提高患者安全性

7、批次间差异最小化

8、无血清、无动物源性，相关风险最小化

价值定位——传统培养基相比PromoCell MSC DXF培养基的优势

1、自主配制类：用于细胞扩增的、化学成分明确的DXF培养基，可在维持多能性表面表型的同时减少批间差异，并且节约时间和精力，可使细胞达到您预期的最终状态。

2、含血清型类：用于细胞扩增的、化学成分明确的DXF培养基，可在维持多能性和表面表型的同时减少批间差异，并且节约时间和精力，可使细胞达到您预期的最终状态。

3、不含血清型类：DXF即用型培养基简化了细胞培养流程并优化了生产率，在每次传代中，可使细胞的倍增度更高，减少了总成本、时间和污染风险。

4、无异源培养基类：DXF即用型培养基简化了细胞培养流程并优化了生产率，在每次传代中，可使细胞的倍增度更高。

FAQ

1、什么是人纤连蛋白溶液？

答：它是一种纤连蛋白细胞外基质，其促贴壁性能可以优化PromoCell MSC DXF培养基及补充剂的培养效果

2、其它纤连蛋白也起作用吗？

答：是的，但我们不建议将动物源性纤连蛋白用于人体细胞的培养。PromoCell也提供牛纤连蛋白C-43050

3、需要使用人纤连蛋白溶液对培养容器表面进行预处理吗？

答：需要，因为PromoCell的MSC DXF培养系统中不含促进细胞贴壁的物质，所以培养前建议使用人纤连蛋白（C-43060）对培养容器表面进行预处理。

4、你能给我们提供一份MSC培养基和补充剂成分的清单么？

答：不能，这属于PromoCell的保密条款