材料与仪器
MSCs
α-MEM FBS 组织培养级二甲亚砜(DMSO) 冻存液:含30%FBS和5%DMSO的α-MEM。过滤除菌(为进一步确保安全和使冻存液澄清。高浓度血清和DMSO混合时冻存液会变混浊)
聚丙烯离心管 15ml和50ml PBSA 0.22μm滤膜的真空过滤器 50ml 冻存管 2ml 微量移液器枪头 NalgeneCryo-1℃冻存容器 ThermoULT-80℃低温冰箱或同等设备 装满医用级别液氮的液氮罐
α-MEM FBS 组织培养级二甲亚砜(DMSO) 冻存液:含30%FBS和5%DMSO的α-MEM。过滤除菌(为进一步确保安全和使冻存液澄清。高浓度血清和DMSO混合时冻存液会变混浊)
聚丙烯离心管 15ml和50ml PBSA 0.22μm滤膜的真空过滤器 50ml 冻存管 2ml 微量移液器枪头 NalgeneCryo-1℃冻存容器 ThermoULT-80℃低温冰箱或同等设备 装满医用级别液氮的液氮罐
步骤
(a)所得的MSC细胞悬液,500g离心10min。
(b)在冻存管上标记细胞来源、日期和细胞代数。
(c)用预热的冻存液以1X106个细胞/ml的密度重悬沉淀,每个冻存管中加入1ml,分装成若干管。在DMSO存在的情况下,勿使MSCs在室温放置20min以上。
(d)向Cryo-1℃冻存容器内装人异丙醇至刻度线,将冻存管置于容器内。
(e)将容器置于-80℃至少15h。
(f)将冻存管转移至液氮,至少可保存3年。
来源:丁香实验