汤姆卜丽波
可以做的,能p出来,只要有一点表达都能p出来
loveliufudan
您的表达基因上有连续的A,说明您可能是在大肠杆菌中表达了一个带有poly(A)尾的外源基因。在这种情况下,您可以尝试使用oligo(dT)引物进行逆转录。
使用oligo(dT)引物进行逆转录的步骤如下:
RNA提取:从转化后的大肠杆菌细胞中提取总RNA,可以使用RNA提取试剂盒或经典的酚氯仿提取法。
RNA纯化:为了消除RNA中可能存在的DNA污染,请使用DNase I对RNA样品进行处理。
RNA定量:使用NanoDrop或类似设备对纯化后的RNA进行定量,并评估其纯度和完整性。
逆转录反应:使用oligo(dT)引物和逆转录酶(如M-MLV、SuperScript III等)按照厂商建议的方案进行逆转录反应。在逆转录反应中,oligo(dT)将结合到mRNA的poly(A)尾,并作为反应的起始位点。
qPCR:逆转录反应完成后,将产物用于qPCR实验。设计特异性引物靶向您的目标基因,然后使用合适的qPCR试剂盒和实时PCR仪器进行qPCR。
请注意,虽然可以尝试使用oligo(dT)引物进行逆转录,但是原核生物的mRNA不稳定性可能导致结果偏低。您可以考虑使用针对您目标基因特异性的随机引物,以便更准确地评估目标基因的表达水平。
毛利小五郎的徒弟
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