细胞实验

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

用胰蛋白酶消化单层培养，或从悬浮培养中取样；准备一张盖玻片，将细胞加到血细胞计数板的小室内。在显微镜下计数细胞，计算细胞浓度。 来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

培养物用甲醇固定，直接用未稀释的 Giemsa 液进行染色，然后1：10 稀释染液，清洗培养物，在潮湿状态下观察。

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

将培养物放在显微镜的载物台上，打开电源，选择合适的镜头，聚焦于标本。如果必要的话，将聚光器和相差环调节在中心。

细胞层（buffy coat）或另一种混合细胞悬液同与抗体连接的微珠混合，稀释后放人一个磁性分离柱中。与微珠结合的细胞会贴到柱子的侧壁上，而未结合磁珠的细胞则流过柱子。将分离柱从磁场移开，结合微珠的细胞就从柱子上释放，用针栓从柱中收集。

将细胞依次置于一系列浓度的 MTX 中几周，定期更换含有相同药物浓度的新鲜培养基。挑选出其中只有一小部分细胞存活并且形成集落的培养瓶继续培养。将选出的这些细胞置于原浓度或高于原浓度 2~10倍的 MTX 中继续培养，直至得到理想的抗药性。

用加样枪或 Pasteur 吸管吸取集落，移至培养瓶或多孔板的培养孔中。

胰蛋白酶消化后，用 EDTA 分散从皮肤片分离的表皮片，然后用添加 bFGF（FGF-2）的无血清培养液培养。

将培养瓶倒置放于 X 射线机或 60Co 源下，用铅块遮蔽需要的集落。

肿瘤的培养细胞及体外转化的细胞，都能表现出生长控制的异常，例如，更髙的饱 和密度、在琼脂中形成集落以及均质细胞生长成汇合的单层。这些细胞系表现出 对血清浓度及生长因子的依赖性较低，通常具有更髙的克隆形成率。同时推测，细胞获 得一定程度的自主生长是由于癌基因的过度表达或抑制基因的缺失。生长控制通常是自 分泌式的，如细胞分泌促分裂素。为此，细胞通常具有受体或者表达受体，或其信号传 导处于永久激活或不受

将集落在瓷制克隆环、玻璃环、PTFE 环或者不锈钢环中用胰蛋由酶消化后移至24孔或12孔板中的一个孔或者直接种于 25 cm2的培养瓶内。

乳汁和乳房复位成形术切除组织是正常乳腺导管上皮的合适材料来源，从乳汁能得到较纯的上皮细胞。最好用胶原蛋白酶进行初步消化分离，在胎儿小肠饲养层上培养细胞可抑制正常组织和癌组织的基质细胞污染,用最适宜的培养液能对上皮细胞进行连续传代和克隆培养。胶原蛋白凝胶培养法有利于构建类似于供体组织的三维结构。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

将细胞悬浮在含美希索的培养基中，将这种细胞种于铺有琼脂（或琼脂糖）凝胶底层的培养皿中。

尽管人结肠癌的连续细胞系已有许多报道，但正常肠上皮培养的报道较少。Owens 等能够从胎儿肠上皮分离细胞，建立有限细胞系（FHS74Int)。鼠肠上皮细胞系IEC-6得到了广泛应用。本方案是由 Booth 和 O’Shea 的方法简化而来的。关于详细描述、不同方法和应用应査阅他们的方法。

温度高时琼脂呈液态，但在37℃ 时成凝胶状态，细胞悬浮在温暖的琼脂凝胶培养基中，待琼脂形成凝胶后进行培养，形成散在集落，很容易分离。

由于根据需要的器官培养技术需将组织放在理想的气体和营养物质交换的位置，故这残技术大多数是将组织放在半间体琼脂凝胶底物上 或凝 集 血 浆的气液界面卜.，或放在由不锈钢网支托的微孔滤膜、 擦 镜 纸 或 人 造 纤 维 的 筏 上，或 黏 附 到 有 机 玻 璃 或 树 脂 玻 璃 条上的气液界面。 目前用滤膜培养皿最容易获得这种几何形状。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

将 4~8 只新生鼠的小脑切成小立方块，放入 HBSS，在 37°C 条件下用胰蛋白酶消化 15 min。将细胞接种于涂有 L-多聚赖氨酸的培养皿或培养瓶。

接种同源或异源细胞—比如来自小鼠胚胎的细胞。待受测细胞克隆培养之前，中等密度，用射线照射或药物作用使其失去增殖能力。