氨甲喋呤抗性和 DHFR 扩增

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

将细胞依次置于一系列浓度的 MTX 中几周，定期更换含有相同药物浓度的新鲜培养基。挑选出其中只有一小部分细胞存活并且形成集落的培养瓶继续培养。将选出的这些细胞置于原浓度或高于原浓度 2~10倍的 MTX 中继续培养，直至得到理想的抗药性。

来源：丁香实验

操作方法

方案14.9 氨甲喋呤抗性和 DHFR 扩增

1. 克隆培养亲代细胞形成生长旺盛、基因型一致的细胞群体，用于筛选。 2. 用无菌 NaCl 0.15 mol/L ( 0.85 % ) 稀释 MTX，临床使用的包装是浓度为 2.5 mg/ml 的溶液。 3. 在几个相同的培养瓶中分别种 2.5×105 个细胞，每个培养瓶中加入不含 MTX 或含 0.01 μg/ml、0.02 μg/ml、0.05 μg/ml 和 0.1 μg/ml MTX