蛋白质合成实验

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

比色法可测定在任何一个时间点上的总蛋白量。在一定时期内连续观察可以用来测定净蛋白质的累积或丟失（也就是合成的蛋白质—降解的蛋白质）。此时蛋白质合成可以用放射标的氨基酸与细胞孵育来进行液闪测定，诸如 ³H -亮氨酸或 ³⁵S-甲硫氨酸，所测定的是掺入到 10⁶ 个细胞或是某一段时间内每克蛋白质中的放射活性。

来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

来源：丁香实验

操作方法

方案21.6 蛋白质合成实验

材料无菌细胞培养，如 1X104～ 1X106 个细胞，24 孔板 3H-亮氨酸。无血淸培养基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特异活性并不重要，因为它将由培养基中的亮氨酸浓度决定）非无菌 SLS 或 SDS，1% (35m mol/L ) 溶于 0 .3 mol/L NaOH 三氯醋酸（TCA) 液闪瓶 Eppendorf 管闪烁液