免疫学实验

肌肉组织由肌细胞和肌纤维组成，可分为骨骼肌、心肌和平滑肌。骨骼肌含有横纹，肌纤维被结缔组织连接与包围，纤维成束排列，而每条肌纤维周围含有网状纤维和少贵的结缔组织。心肌纤维也含有横纹，纤维之间相互连接成网状结构。平滑肌纤维的外表面含有网状纤维和胶原纤维成分。根据需要通过不同的特殊染色和组织化学方法，能够显示肌纤维和结缔组织纤维等成分的变化情况。内容来源于《免疫组织化学实验技术及应用》

结缔组织广泛分布于入体和动物体内，而疏松结缔组织在组织损伤后的修复过程中，纤维细胞可转化为活跃的成纤维细胞。成纤维细胞能形成胶原纤维、弹力纤维和网状纤维以及基质等成分。致密结缔组织的间质内含有大量纤维，排列紧密，细胞和基质比较少，主要含有弹性纤维，又称为弹性致密结缔组织。网状结缔组织由网状细胞和网状纤维组成，其化学成分含有蛋白质和多糖。通过染色试剂，能够证明结缔组织纤维分类和纤维之间存在的相互关系

提高 IHC 敏感性有几种途径。一是依靠各种 IHC 的前处理，例如酶的消化、高温的抗原修复，虽然对其的基本原理不十分清楚，但却十分实用；其次是增加 IHC 方法的放大倍数，主要是酶结合量的增加。内容来源于《免疫组织化学实验技术及应用》

20 世纪 70 年代以来，随着免疫组织化学的广泛应用，在技术方法上不断加以改迸，涌现了一批新的技术方法，尤其是免疫组织化学与细胞生物化学紧密结合，一些具有双价或多价结合力的物质，如生物素（biotin）、亲和素（avidin）、链霉亲和素（streptavdin）、植物凝集素（lectin）、葡萄球菌 A 蛋白（staphylococcalproteinA，SPA）等，被应用于免疫组织化学中，从

免疫碱性磷酸酶组织化学技术是以碱性磷酸酶（AKP 或 AP）取代 HRP 来显示结果的免疫酶组织化学技术。最早出现的是间接免疫碱性磷酸酶法（IAP），1983 年 Mason 及 Moir 等建立了碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（APAAP）复合物法。随后，人们建立了更为敏感的生物素-亲和素-碱性磷酸酶复合物（ABC-AP）法、S-P 碱性磷酸酶法、EnVisicm 碱性磷酸酶法以及用于原位杂交检测的抗地

由于在酶标记抗体过程中，酶与抗体的结合可损害部分抗体和酶的活性，从而降低了抗体的效价。另外，血清中的非特异性抗体也可以被酶标记，这些非特异酶标记抗体与组织中相应抗原结合，放大了非特异背景染色。为了避免酶标记抗体法的上述缺点，Sternberger（1969）在酶标抗体法的基础上，创建了非标记抗体免疫酶技术。该方法先用酶（HRP 或 AKP）去免疫动物（羊、兔和鼠等），使其产生高效价、特异性的抗酶抗

很多免疫学实验研究均需采集动物的血液，例如抗体主要存在于血淸内，所以在动物体内制备抗体均需采集免疫后的动物血液；又如豚鼠血清内含补体量较多，所以需要补体时常采集豚鼠 血液分离血清，其他如各免疫细胞功能测定等研究也常采血分离免疫细胞。因此，采集动物血液的操作也是免疫学最基本的实验技术之一。采集血液的部位视动物的种类、取血的多少以及是否需要保留动物而定。例如：1. 采集家兔血液有耳静脉采血法、耳动脉放

抗原、抗体在凝胶中扩散，并进行沉淀反应，叫做免疫扩散反应（immunodiffusion）。将抗原与其相应抗体放在凝胶（如琼脂）平板中的邻近孔内，使它们互相扩散，当扩散到两者浓度比例合适的部位相遇时，即出现乳白色的沉淀线，称为双向免疫扩散试验。此方法是由 Ouchterlony 所提出，因此又称 Ouchterllony 技术。来源：《微生物学实验（第三版）》

环状沉淀反应广泛应用于法医学的血迹鉴别和食物掺假的测定。通常这些可疑材料作为抗原，用标准抗血清加以鉴定。它具有用材少的优点，例如衣服等物品上的血迹用生理盐水洗下就可作为抗原进行检查。来源：《微生物学实验（第三版）》

细菌细胞或红细胞等颗粒性抗原与特异性抗体结合后，在有电解质的情况下，会出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应，也叫直接凝集反应。凝集反应可说是经典的血淸学反应，使用历史长，并一直沿用至今，但技术方法有很大的发展与改进，例如，除直接凝集反应外，又有将可溶性抗原吸附到颗粒性载体（如红细胞、白陶土、离子交换树脂和火棉胶颗粒等）表面，然后再与相应抗体结合的间接凝集反应。用红细胞作为载体的间接凝集反应叫间接血凝

人体和动物机体的吞噬细胞可根据其形态大小分为大吞噬细胞和小吞噬细胞，大吞噬细胞是指单核一巨噬细胞系统的细胞，小吞噬细胞主要是中性粒细胞。它们对外来的细菌或其他异物有吞噬、消化作用，是机体非特异性免疫的重要工具，同时也是特异性免疫的细胞成分，例如抗原递呈作用等。吞噬作用是检测吞噬细胞功能的最常用的方法之一。一般用吞噬了细菌或其他异物的吞噬细胞百分率和被吞噬的细菌或其他颗粒的数量（吞噬指数）来表示吞噬

将抗原注射于动物体，可刺激动物的 B 淋巴细胞转化为浆细胞而产生特异性抗体，待动物血清中累积大量抗体时，采集其血液，分离析出血清，此即含抗体的免疫血清，或称抗血清。制备特异性强、效价高的免疫血清对于微生物的鉴定，传染病的诊断与治疗，抗原分析，免疫球蛋白的鉴定及其他蛋白质的鉴定与研究均有很大的用途。来源：《微生物学实验（第三版）》

进行蛋白质定位的免疫组织化学技术。来源：《精编分子生物学实验指南》第五版

制备抗磷酸肽的抗体（即识别磷酸化肽的抗体）是可能的，该抗体只识别处于磷酸化状态的蛋白质，而不会与非磷酸化的同类蛋白质或其他磷酸蛋白质发生交叉反应。由于磷酸化经常意味着蛋白质处于功能状态或活性状态，因此这种抗体是蛋白质功能状态的一种便利的探针。与常规抗体不同的是，抗磷酸肽的抗体不仅能提供蛋白质含量的信息，还能提供其活性信息。多克隆抗体的纯化包含多步亲和层析以对具有合适反应性的抗体进行阴性筛选和阳性筛

单克隆抗体的纯化可用于：（1）制备体外诊断试剂；（2）制备治疗用药。

与多克隆抗血清相比，采用单克隆抗体（MAb) 的最主要的优势就是有可能得到大量的特异性单克隆抗体可供应用。MAb 制剂通常包括杂交瘤上清、由接种了杂交瘤的小鼠制备的腹水，以及纯化的 MAb。腹水中包含有高浓度的 MAb，但它不是纯的 MAb 制剂。为得到纯化的制剂，可以把培养上清或腹水拿来进行亲和层析 。绝大多数杂交瘤可以长成为腹水瘤。MAb 在这种腹水中的饱和浓度可达 1:500 的滴度。来源：

用弗氏佐剂乳化抗原溶液或均质化含蛋白抗原的聚丙烯酰胺凝胶条带。注射抗原用于免疫小鼠，隔 2～3 周一次。每次辅助注射后的第 7 天采血测血清抗体水平，当达到足够的抗体滴度时就用于杂交瘤试验。来源：《精编分子生物学实验指南(第五版)》

双重标记是利用免疫学和细胞化学原理，在同一张切片上同时采用或先后采用不同颜色的荧光色素或酶促产物，或采用不同直径大小颗粒胶体金来原位标记两种或两种以上抗原-抗体复合物，达到在同一细胞或亚细胞水平显示不同抗原成分（定性、定位、定撤），分析不同抗原成分相互间功能的增消关系，操作遵循的原则与要求同单标免疫组化方法。其组合方法多种多样，可根据各实验室现有试剂进行组合，也可购置较为成熟的商品化试剂盒。另外，

介绍了一种制备可溶性M H C -I g 二聚体的方法，介绍了一种制备多聚体M H C -I/肽复合物的方法。 作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

介绍了一种受磷酸耗调节的能有效介导反转录载体质粒D N A 进入细胞的反转录病毒包装系统的转染方法。介绍了基于P C R 技术检测 B 细胞发育过程中的同型转换。用P C R 检测稀有 m R N A ，分别为 P C R 对 人 或 小 鼠 的 T C R 可变区基因进行定性和定量，通 过 P C R 产物克隆和测序来研究表达基因的连接多样性。提供了 R N A 酶保护实验方案， R N A 酶