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简介
制备抗磷酸肽的抗体(即识别磷酸化肽的抗体)是可能的,该抗体只识别处于磷酸化状态的蛋白质,而不会与非磷酸化的同类蛋白质或其他磷酸蛋白质发生交叉反应。由于磷酸化经常意味着蛋白质处于功能状态或活性状态,因此这种抗体是蛋白质功能状态的一种便利的探针。与常规抗体不同的是,抗磷酸肽的抗体不仅能提供蛋白质含量的信息,还能提供其活性信息。
多克隆抗体的纯化包含多步亲和层析以对具有合适反应性的抗体进行阴性筛选和阳性筛选。
来源于《精编分子生物学实验指南(第五版)》
来源:丁香实验
操作方法
1. 将填装有 BSA-琼脂糖亲和介质的柱子和填装有磷酸酪氨酸亲和介质的柱子以串联的方式连接好。2. 使大约 15 ml 的粗制血清通过重力作用流过两根柱子。用 PBS/叠氮化物溶液洗涤直到所有的黄色血清穿过柱子(或用分光光度计检测流出液体的 A280 直至达到基底吸收值),再用 5~10 ml PBS/叠氮化物溶液洗涤,收集所有穿过柱子的洗涤液,其中可能含有所要的抗体。待血清过柱后,可用以下步骤