抗Ig抗体的制备

（一）抗原制备
Ig是免疫球蛋白，对异种动物而言，是良好的抗原物质。可以刺激异种动物产生抗Ig血清，经适当提取后，产生抗Ig抗体，又叫第二抗体或抗抗体。在多数的间接标记反应中，均需制备抗Ig抗体。

（二）材料与 试剂
1．提取的动物Ig
2．弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂
3．青霉素和链霉素
4．实验动物 兔
5．其它材料及 试剂

（三）操作方法
1．免疫方法 可以采用以下各种方法之一进行免疫。
（1）淋巴结注射法：①在兔的两后足跖部皮下（或皮内）注射活卡介苗50mg（每侧约0.30ml）。7～10天后，兔跖及腘肌淋巴结肿大；②于肿大的两侧淋巴结内各注射加有完全 佐剂 的IgG乳化抗原0.50ml(含IgG 5mg/ml、青霉素1 000U/ml、链霉素1 000μg/ml)；③必要时，14天后，重复步骤②一次；④再过7天后，于两侧淋巴结内各注射加有完全 佐剂 的IgG乳化抗原0.50ml（含IgG5mg/ml、青霉素1 000U/ml、链霉素1 000μg/ml）；⑤5～7天后，耳静脉采血。测定 血清 效价。
（2）皮下多点注射法：①家兔两侧掌（跖内各注射含有完全佐剂抗原0.10ml（IgG含量5mg/ml）；②7～10天后，脊柱两侧多点（颈、胸、腰椎各两点、共6点）皮下注射含不完全佐剂的抗原，每点0.50ml；③7～10天后，脊柱两侧重复注射一次；④7～10天后试血。不合格者重复步骤③。
（3）多途径联合注射法：①两侧掌（跖）内侧皮下注射含完全佐剂抗原0.50ml（IgG量为5mg/ml）；②14天后，多点皮下注射含有不完全佐剂抗原；③7天后，耳静脉注射不含佐剂的抗原2ml；④测定 血清 抗体效价，不合格者重复步骤③，并适当递增IgG量。
2．效价测定 采用 琼脂 扩散法。
⑴ 将血清倍比稀释，加入外周孔。
⑵ 中间孔加动物Ig。
⑶ 37℃湿盒琼扩24小时，观察结果。

（四）结果判定
1．抗Ig的效价测定 琼脂 扩散效价达1﹕16或1﹕32者为合格。
2．纯度鉴定 采用琼扩法。中间孔加抗Ig血清，外周孔加Ig和标准品Ig。在抗Ig与Ig以及标准品Ig均出现一条沉淀线，且这两条沉淀线相互融合者，说明提取的Ig是纯的。