抗免疫球蛋白Ig抗体的制备

一、抗原制备

Ig是免疫球蛋白，对异种动物而言，是良好的抗原物质。可以刺激异种动物产生抗Ig血清，经适当提取后，产生抗Ig抗体，又叫第二抗体或抗抗体。在多数的间接标记反应中，均需制备抗Ig抗体。

二、材料与试剂

1.  提取的动物Ig

2.  弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂

3.  青霉素和链霉素

4.  实验动物兔

5.  其它材料及试剂

三、操作方法

1.  免疫方法：可以采用以下各种方法之一进行免疫。

（1）淋巴结注射法：

①在兔的两后足跖部皮下(或皮内)注射活卡介苗50 mg(每侧约0.30 ml)。7～10天后，兔跖及腘肌淋巴结肿大;

②于肿大的两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的IgG乳化抗原0.50 ml(含IgG 5 mg/ml、青霉素1 000 U/ml、链霉素1 000 μg/ml);

③必要时，14天后，重复步骤②一次;

④再过7天后，于两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的IgG乳化抗原0.50 ml(含IgG 5 mg/ml、青霉素1000 U/ml、链霉素1 000 μg/ml);

⑤5～7天后，耳静脉采血。测定血清效价。

（2）皮下多点注射法：

①家兔两侧掌(跖内各注射含有完全佐剂抗原0.10 ml（IgG含量5 mg/ml）;

②7～10天后，脊柱两侧多点(颈、胸、腰椎各两点、共6点)皮下注射含不完全佐剂的抗原，每点0.50 ml;

③7～10天后，脊柱两侧重复注射一次;

④7～10天后试血。不合格者重复步骤③。

（3）多途径联合注射法：

①两侧掌(跖)内侧皮下注射含完全佐剂抗原0.50 ml(IgG量为5 mg/ml);

②14天后，多点皮下注射含有不完全佐剂抗原;

③7天后，耳静脉注射不含佐剂的抗原2 ml;

④测定血清抗体效价，不合格者重复步骤③，并适当递增IgG量。

2.  效价测定：采用琼脂扩散法。

（1）将血清倍比稀释，加入外周孔。

（2）中间孔加动物Ig。

（3）37 ℃湿盒琼扩24小时，观察结果。

四、结果判定

1.  抗Ig的效价测定 琼脂扩散效价达1﹕16或1﹕32者为合格。

2.  纯度鉴定 采用琼扩法。中间孔加抗Ig血清，外周孔加Ig和标准品Ig。在抗Ig与Ig以及标准品Ig均出现一条沉淀线，且这两条沉淀线相互融合者，说明提取的Ig是纯的。