亲和免疫组织化学实验

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

20 世纪 70 年代以来，随着免疫组织化学的广泛应用，在技术方法上不断加以改迸，涌现了一批新的技术方法，尤其是免疫组织化学与细胞生物化学紧密结合，一些具有双价或多价结合力的物质，如生物素（biotin）、亲和素（avidin）、链霉亲和素（streptavdin）、植物凝集素（lectin）、葡萄球菌 A 蛋白（staphylococcalproteinA，SPA）等，被应用于免疫组织化学中，从而建立了 LAB、BAB、ABC 及 SPA-HRP、SPA-胶体金等方法。

这些方法的共同特点是以一种物质对某种组织成分具有高度亲和力为基础，它们一方面区别于古老的组织化学的分解、置换、氧化和还原反应，另一方面本质上不是抗原-抗体反应，因此 Bayer 在 1976 年首次称之为亲和组织化学（affinity histochemistry）或称亲和细胞化学（affinity cytochemistry）。亲和细胞化学不同于免疫细胞化学，亲和细胞化学是利用两种物质之间的高度亲和能力而相互结合的化学反应；免疫细胞化学则是抗原-抗体的反应，但是从广义上来看抗原抗体间也是一种物质间的相互亲和，本质上也属于亲和组织化学范畴，只是近代免疫组织化学方法的更新更突出了「亲和」这个组织化学技术特点。

目前，亲和组织化学中的亲和物质包括亲和素与生物素、植物凝集素与糖类、葡萄球菌 A 蛋白（SPA）与 IgG、抗原与抗体、阳离子与阴离子、激素维生素和脂质与受体等。这些方法的建立，使免疫组化技术的敏感性得到进一步提髙，更有利于微量抗原（或抗体）在细胞或亚细胞水平的定位，扩大了其应用范围，从而促进了免疫组化技术的发展。

来源于《免疫组织化学实验技术及应用》

来源：丁香实验

操作方法

ABC 法

1. 4 μm 石蜡切片常规脱蜡至水，PBS 洗 3×3 min。2. IHC 的前处理视特异性一抗不同，可采用蛋白酶消化或热诱导的微波抗原修复（AR），PBS 洗 3×3 min。3. 3％过氧化氢孵育 10 min（可省略），以阻断内源性过氧化物酶活性。4. PBS 洗 3×3 min。5. 10％非免疫性动物血清孵育 10 min（可省略），以减少非特异性背景，无需冲洗，只需吸去多余血清

LSAB 法

1. 石蜡切片常规脱蜡至水，PBS 洗 3×3 min。2. IHC 的前处理视特异性一抗不同，可采用蛋白酶消化或热诱导的微波抗原修复（AR），PBS 洗 3×3 min。3. 3％过氧化氢孵育 10 min（可省略），以阻断内源性过氧化物酶活性。4. PBS 洗 3×3 min。5. 10％非免疫性动物血清孵育 10 min（可省略），以减少非特异性背景，无需冲洗，只需吸去多余血清。6. 滴

CSA 法

实验试剂制备流程：①A 液：临用前将 Bio-NHS 溶在 DMF 中（10 mg/ml）。②B 液：10 mg/ml 酪胺盐溶在 DMF 中（相当于 58 μmol/L），加入 1.25 倍量的 TEA（从 7.2mol/L 的贮存液中取 10 μl）。③C 液：在 A 液中加入 1.1 倍摩尔浓度的 B 液，在暗处使充分酰化 2 h，最后用乙醇稀释到 1 mg/ml。C 液在 4℃ 中可保存

改进 CSA法

1. 4 μm 石蜡切片常规脱蜡至水，PBS 洗 3×3 min。2. 首先用 0.3％过氧化氢甲醇破坏内源性过氧化物酶的活性，室温 20 min。3. PBS 洗 3×3 min。4. 抗原修复，室温冷却 20 min。5. PBS 洗 3×3 min。6. 第二次用 0～3％过氧化氢 PBS 破坏内源性过氧化物酶的活性，室温 5 min。7. 用温的（35℃）TBST [0.02 mol/