ABC 法（亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法）

ABC 法即亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法，是许世明于 1981 年在 BAB 法和 LAB 法的基础上改良的，其特点是利用亲和素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。ABC 法与 LAB 法、BAB 法不同的是第一抗体不为生物素所标记，生物素标记的第二抗体与 ABC 复合物相连接，最后进行显色反应定位。复合物是将过氧化物酶结合在生物素上，再将生物素-过氧化物酶连接物与过量的亲和素反应而制备的。ABC 法与 LAB 法、BAB 法相比较具有敏感性高、特异性强、背景染色淡等优点。

石蜡切片 非免疫性动物血清
蛋白酶 PBS H2O2 树胶 特异性一抗 生物素标记二抗 ABC 复合物

1. 4 μm 石蜡切片常规脱蜡至水，PBS 洗 3×3 min。

2. IHC 的前处理视特异性一抗不同，可采用蛋白酶消化或热诱导的微波抗原修复（AR），PBS 洗 3×3 min。

3. 3％ 过氧化氢孵育 10 min（可省略），以阻断内源性过氧化物酶活性。

4. PBS 洗 3×3 min。

5. 10％ 非免疫性动物血清孵育 10 min（可省略），以减少非特异性背景，无需冲洗，只需吸去多余血清。

6. 滴加适当稀释的第一抗体，37℃ 孵育 60 min 或 4℃ 过夜。

7. PBS 洗 3×3 min。

8. 滴加生物素标记的二抗，37℃ 孵育 30～60 min。

9. PBS 洗 3×3 min。

10. 滴加 ABC 复合物（提前 30 min，A 液与 B 液等量混合），37℃ 孵育 30～60 min。

11. PBS 洗 3×3 min。

12. 0.04％ DAB（含 0.03％ H₂O₂）显色 5～10 min。

13. 复染，脱水，常规树胶封固和结果观察。