免疫组化ABC法步骤
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1、4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液(4℃)中过夜。蜡块制作。切片,贴片。0.01MKPBS清洗5min×3后;
2、加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液(甲醇80ml+0.01MKPBS 100ml+30%过氧化氢)30min,以消除内源性过氧化物酶的影响,0.01MPBS清洗5min×3;
3、加入配好的0.3% Triton X100(30% Triton X100+0.01MKPBS 100ml)30min,以增加细胞的通透性,0.01MKPBS清洗5min×3;
4、加入用血清稀释液(牛血清白蛋白1.00g+0.01MPBS 100ml+叠氮纳0.08g)稀释的一抗,4℃存放24-48h;吸去抗体,0.01MKPBS洗5min×3;
5、加入0.01MKPBS稀释的的二抗,室温孵育2h。0.01MKPBS洗5min×3;
6、加入ABC复合物之类的抗体,室温孵育2h,0.01MKPBS洗5min×3;蒸馏水迅速冲三次;
7、加入显色液,进行免疫组织化学显色,时间一般不超过30min,可不时在显微镜下进行观察,待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液,用蒸馏水迅速冲三次后加入0.01MKPBS终止反应;
8、梯度酒精脱水之后,封片,拍照。