LSAB 法

LSAB 法或称 S-P 法、SABC 法，它是采用生物素标记的第二抗体与结合有 HRP 或 AKP 酶的链霉亲和素（streptavidin）连接来测定细胞及组织中的抗原。链霉亲和素是一种从链霉菌培养物中提取的蛋白质，相对分子质量 60000，不含糖链，等电点 pI 为 6.0～6.5。链霉亲和素同一定浓度的生物素化酶混合后，就能形成链霉亲和素-酶复合物，这种复合物中至少存在 1 个尚未被生物素占据的亲和素结合位点，可以和各种生物素标记抗体结合。由于采用了改良的亲和纯化技术和酶标技术，LSAB 法敏感性更髙、背景更清晰，其原理见图 5-3。

1. 石蜡切片常规脱蜡至水，PBS 洗 3×3 min。

2. IHC 的前处理视特异性一抗不同，可采用蛋白酶消化或热诱导的微波抗原修复（AR），PBS 洗 3×3 min。

3. 3％ 过氧化氢孵育 10 min（可省略），以阻断内源性过氧化物酶活性。

4. PBS 洗 3×3 min。

5. 10％ 非免疫性动物血清孵育 10 min（可省略），以减少非特异性背景，无需冲洗，只需吸去多余血清。

6. 滴加适当稀释的第一抗体，37℃ 孵育 60 min 或 4℃ 过夜。

7. PBS 洗 3×3 min。

8. 滴加生物素标记的二抗，37℃ 孵育 30～60 min。

9. PBS 洗 3×3 min。

10. 滴加过氧化物酶标记的链霉亲和素，室温孵育 30 min。

11. PBS 洗 3×3 min。

12. 0.04％ DAB（含 0.03％ H₂O₂）显色 5～10 min。

13. 复染，脱水，常规树胶封固，结果观察。

此方法与 ABC 法相比，不需 A、B 两液提前混合，操作者容易掌握，稳定性高，由于采用了低等电点的链霉亲和素，其内源性生物素干扰要低于 ABC 法。目前该法仍将是诊断和研究的常用方法，有现成的即用型 S-P 试剂盒出售，种类很多，还有针对一抗是羊、鸡、大鼠、小鼠和兔的试剂盒。该法生物素化二抗和链霉亲和素-HRP（AKP）的孵育（室温）时间仅需 10～15 min，其敏感性和所用时间与 EnVision 法一致。其最大的缺点是内源性生物素的干扰。