亲和免疫组织化学技术的染色步骤

1．标记卵白素—生物素（LAB）技术
（1）石蜡切片常规脱腊入水。
（2）0.3%H ₂ O ₂ —甲醇10分钟，水洗。
（3）PBS洗3次。
（4）加生物素(Biotin)标记的特异性一抗，37。C30分钟，置湿盒内。
（5）PBS洗3次。
（6）加酶标记的卵白素（Avidin）, 37。C30分钟。
（7）PBS洗3次。
（8）DAB显色。
（9）流水冲洗，复染、脱水、封片。
2．桥式卵白素-生物素（BRAB）技术
（1）同LAB技术（1）--（5）
（2）加卵白素（Acidin）37。C30分钟。
（3）PBS洗3次。
（4）加酶标记的生物素(Biotin), 37。C30分钟。
（5）同LAB技术（7）--（9）
3．卵白素—生物素---过氧化物酶复合物（ABC）技术（三步法）
（1）同LAB技术（1）--（2）
（2）必要时胰酶消化，37。C30分钟。
（3）蒸馏水洗，PBS洗2次。
（4）正常羊血清（1：5-10）室温，10-20分钟。
（5）特异性抗体适当稀释，置湿盒中37。C60分钟或4。C过夜。
（6）PBS洗3次。
（7）生物素化（Biotin）第二抗体，37。C20分钟。
（8）PBS洗3次。
（9）ABC试剂，37。C30分钟，置湿盒中。
临用前将试剂A与试剂B等量混合，稀释为1：100的浓度，滴加于切片上。
（10）PBS洗3次。
（11）同LAB技术（7）--（9）
4．ABC快速法
在大量标本染色或快速切片的免疫组化染色时，可采用ABC快速染色法。
（1）同LAB技术（1）--（3）
（2）PBS洗3次。
（3）用含4%BSA和1%正常血清的PBS作用2分钟。
（4）特异性抗体—生物素化IgG—ABC混合液孵育15分钟。
（5）PBS洗3次。
（6）同LAB技术（8）--（9）
特异性抗体—生物素化IgG—ABC混合液的配制：于染色前30分钟用等体积的生物素化IgG—ABC混合，然后加入经适当稀释的特异性抗体。