原理
抗生物素蛋白具有与4个生物素亲和力极高的结合点，ABC法是利用抗生物素蛋白分别连接生物素标记二抗和生物素标记的酶。
材料与仪器
抗生物素蛋白
Tris-HCl DAB 丙酮 PBS 苏木素 二甲苯
恒温培养箱
Tris-HCl DAB 丙酮 PBS 苏木素 二甲苯
恒温培养箱
步骤
一、材料准备
1. DAB-H2O2配制：以0.05 mol/l Tris-HCl（pH7.6）溶解3,3-二氨基联苯胺50 mg，使DAN终浓度为0.05%，过滤。显色时加入30%H2O2适量，使其终浓度为0.01%。
二、实验步骤
1. 石蜡切片或冰冻切片均可。
2. 石蜡切片常规脱蜡，冰冻切片可用丙酮固定10 min左右，0.01 mol/l PBS（pH7.2~7.6）洗涤5 min，更换三次洗涤液。
3. 加入兔抗GST-π，室温孵育15 min，PBS洗5 min，洗涤3次，再加入生物素标记的二抗孵育15 min，PBS洗涤5 min，洗3次。
4. 用DAB-H2O2溶液显色，苏木素复染，常规酒精脱水，二甲苯透明后封片。阴性对照用PBS代替抗GST-π抗体。
1. DAB-H2O2配制：以0.05 mol/l Tris-HCl（pH7.6）溶解3,3-二氨基联苯胺50 mg，使DAN终浓度为0.05%，过滤。显色时加入30%H2O2适量，使其终浓度为0.01%。
二、实验步骤
1. 石蜡切片或冰冻切片均可。
2. 石蜡切片常规脱蜡，冰冻切片可用丙酮固定10 min左右，0.01 mol/l PBS（pH7.2~7.6）洗涤5 min，更换三次洗涤液。
3. 加入兔抗GST-π，室温孵育15 min，PBS洗5 min，洗涤3次，再加入生物素标记的二抗孵育15 min，PBS洗涤5 min，洗3次。
4. 用DAB-H2O2溶液显色，苏木素复染，常规酒精脱水，二甲苯透明后封片。阴性对照用PBS代替抗GST-π抗体。
来源：丁香实验
