​ 免疫组织化学法实验

1) 细胞置于冰上冷却，吸去培养液并以4℃的PBS洗涤，吸去PBS。2) 如欲研究细胞表面抗原，则以2% PFA于冰上固定30 min。如研究细胞质抗原，则 可用含0.1% Triton×-100的2% PFA于冰上固定30 min,或以100%甲醇在普通冰箱的结冻室（-10〜-20℃)固定15 min。两种固定细胞质抗原的方法均可获满意结果。然而，用高聚甲醛/Triton×-100固定通常可获更

1) 细胞在冰浴中冷却，然后用台式离心机在4℃以800 g离心5 min (用于淋巴细胞）。吸去培养液并以4℃的PBS重悬细胞。 离心机转速依细胞类型进行调整，但必须低转速离心，以防止损伤细胞。除非特别说明，否则所有离心步骤均在此条件下进行。 2) 离心，吸去PBS，以1〜2 mL 2% PFA固定液，或2% PFA固定液/0. 1% Triton ×- 100重悬细胞，置冰上固定30 min。

1) 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒。从冰冻切片机或冰箱取出载有切片的载玻片，交叉放入玻片盒（每边约6片）或加湿盒中。勿使载玻片相互接触。2) 待载玻片达到室温且未干时，于切片上铺加PBS，勿使溢出玻片。3) 稀释的第一抗体于4℃用微量离心机以13500 g离心2 min (每一载玻片上加40〜 50μL抗体，应能盖住切片）。4) 用与泵相连的巴斯德吸管，在切片的一端吸去玻片上的PBS，并从另