细胞如何做多个抗体的免疫荧光染色？

可以同时染，如果二抗不一样的话，还可以把最明显的先染，最后染表达量低的

注意事项：

（1）每次实验均需设置阳性对照、阴性对照和荧光标记物对照；

（2）直接法双重染色要求一抗的荧光标记物激发波段不同，而间接法双重染色要求一抗不同种属以及二抗携带的荧光标记物激发波段不同；

（3）双染前，要对每个抗体进行单独染色，确定合适染色条件和抗体定位；

（4）注意组织切片或细胞爬片全程保持湿润；

（5）抗体孵育后，用PBS或其他洗涤液充分洗涤组织切片，去除多余抗体；

（6）对于背景较高的组织样本，做组织封闭后效果更好。

原则要求：

1. 严格验证的高特异性抗体：所有 CST 的 IHC-P 验证过的抗体都满足mIHC（多重荧光免疫组化）高特异性的要求。

2. HRP 偶联的针对一抗种属亚型特异的二抗。

3. 酪胺荧光素 (PerkinElmer, Thermo Fisher Scientific 等供应商)。

4. 多光谱成像系统 (PerkinElmer 等)。