如何做好细胞爬片

细胞爬片可以买专门的爬片，几块钱一小包的，爬片用前泡酸，高压消毒（包括镊子和枪头）。把用过的24孔板清洗干净，一孔一片，很方便，又互不干扰。把细胞培养到对数生长期，消化后再滴上去，爬1-2天贴壁后（中间可加适量培养液），可在板子里一直做完。清洗时，将PBS滴在片子上即可，不要剧烈摇晃。需要照相时候，再取出来，细胞面贴在载波片上，最好用50%甘油，中性树脂贴不好，容易毁坏细胞形态。取爬片时候，可以用枪头和镊子，或者用以下战友的方法。

quhualing战友问：

我是用293t细胞做细胞免疫组化，我们这里叫8-ohDG，我们是在24孔板做的，小片子处理好之后放到孔里，紫外线照1小时，之后就可以铺细胞了，我最大的问题是细胞培养24小时之后，镜下看挺好，但只要一洗细胞就会掉很多，几乎剩下的很少，还有一个问题最后一步染色一般要多长时间，我们有时不到一分钟染色就很重，请帮忙解答一下，谢谢。

用什麽固定液，我们用丙酮，是不是固定液也很关键呀，我们固定10分钟

答：小片子处理好之后放到孔里，紫外线照1小时，高压消毒后的小片子，不用再照了

细胞培养24小时之后，镜下看挺好，但只要一洗细胞就会掉很多，几乎剩下的很少，

贴壁时间可以延长，洗时候把PBS轻轻滴在片子上，不要摇。

一步染色一般要多长时间，我们有时不到一分钟染色就很重，

染色时间镜下观察确定，如果染色就很重，适当降低抗体浓度。

玻璃片用冷丙酮(-20度)10-15分钟，可以的，如果放在24孔板里做，最好用甲醛，丙酮会腐蚀有机塑料的。