免疫碱性磷酸酶组织化学实验

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

免疫碱性磷酸酶组织化学技术是以碱性磷酸酶（AKP 或 AP）取代 HRP 来显示结果的免疫酶组织化学技术。最早出现的是间接免疫碱性磷酸酶法（IAP），1983 年 Mason 及 Moir 等建立了碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（APAAP）复合物法。随后，人们建立了更为敏感的生物素-亲和素-碱性磷酸酶复合物（ABC-AP）法、S-P 碱性磷酸酶法、EnVisicm 碱性磷酸酶法以及用于原位杂交检测的抗地高辛（Dig）、抗生物素（biotin）和抗荧光素（FITC）-AKP 检测系统。因免疫碱性磷酸酶技术具有独特优点，如敏感的酶底物显色系统、染色背景低，故应用日益广泛，尤其在原位杂交、TUNEL 等的检测。

本实验主要介绍间接免疫碱性磷酸酶（IAP）法和碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶复合物（APAAP）法、S-P（AKP）法、EnVision 碱性磷酸酶法、PowerVision（AKP）法。

来源于《免疫组织化学实验技术及应用》

来源：丁香实验

操作方法

间接免疫碱性磷酸酶法

1. 切片脱蜡至水，PBS 洗 3 min × 3 次。2. 蛋白酶消化或 AR（组织抗原的暴露或抗原的修复，此步视情况而定）。3. 滴加正常血清，阻断 20 min（减少非特异性背录染色），吸去多余血清。4. 滴加适当稀释的特异性一抗，37℃ 孵育 30～60 min 或 4℃ 过夜，PBS 洗 3 min × 3 次。5. 适当稀释的 AKP 标记的二抗 37℃ 孵育 30～60 min，PB

APAAP 法

1. 切片脱蜡至水，PBS 洗 3 min × 3 次。2. 蛋白酶消化或 AR（组织抗原的暴露或抗原的修复，此步视情况而定）。3. 滴加正常血清，阻断 20 min（减少非特异性背录染色），吸去多余血清。4. 滴加适当稀释的特异性一抗，37℃ 孵育 30～60 min 或 4℃ 过夜，PBS 洗 3 min × 3 次。5. 适当稀释桥抗体（二抗），37℃ 温育 30 min 或室温中孵育 60

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