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免疫碱性磷酸酶组织化学实验

实验分类:

免疫学实验

最新修订时间:

简介

免疫碱性磷酸酶组织化学技术是以碱性磷酸酶(AKP 或 AP)取代 HRP 来显示结果的免疫酶组织化学技术。最早出现的是间接免疫碱性磷酸酶法(IAP),1983 年 Mason 及 Moir 等建立了碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)复合物法。随后,人们建立了更为敏感的生物素-亲和素-碱性磷酸酶复合物(ABC-AP)法、S-P 碱性磷酸酶法、EnVisicm 碱性磷酸酶法以及用于原位杂交检测的抗地高辛(Dig)、抗生物素(biotin)和抗荧光素(FITC)-AKP 检测系统。因免疫碱性磷酸酶技术具有独特优点,如敏感的酶底物显色系统、染色背景低,故应用日益广泛,尤其在原位杂交、TUNEL 等的检测。

本实验主要介绍间接免疫碱性磷酸酶(IAP)法和碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶复合物(APAAP)法、S-P(AKP)法、EnVision 碱性磷酸酶法、PowerVision(AKP)法。


来源于《免疫组织化学实验技术及应用》


来源:丁香实验

操作方法

间接免疫碱性磷酸酶法

1. 切片脱蜡至水,PBS 洗 3 min × 3 次。2. 蛋白酶消化或 AR(组织抗原的暴露或抗原的修复,此步视情况而定)。3. 滴加正常血清,阻断 20 min(减少非特异性背录染色),吸去多余血清。4. 滴加适当稀释的特异性一抗,37℃ 孵育 30~60 min 或 4℃ 过夜,PBS 洗 3 min × 3 次。5. 适当稀释的 AKP 标记的二抗 37℃ 孵育 30~60 min,PB

APAAP 法

1. 切片脱蜡至水,PBS 洗 3 min × 3 次。2. 蛋白酶消化或 AR(组织抗原的暴露或抗原的修复,此步视情况而定)。3. 滴加正常血清,阻断 20 min(减少非特异性背录染色),吸去多余血清。4. 滴加适当稀释的特异性一抗,37℃ 孵育 30~60 min 或 4℃ 过夜,PBS 洗 3 min × 3 次。5. 适当稀释桥抗体(二抗),37℃ 温育 30 min 或室温中孵育 60

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