小鼠免疫实验

实验分类：

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

用弗氏佐剂乳化抗原溶液或均质化含蛋白抗原的聚丙烯酰胺凝胶条带。注射抗原用于免疫小鼠，隔 2～3 周一次。每次辅助注射后的第 7 天采血测血清抗体水平，当达到足够的抗体滴度时就用于杂交瘤试验。

来源：《精编分子生物学实验指南(第五版)》

来源：丁香实验

操作方法

基本方案制备免疫脾细胞：用可溶性抗原致敏

1. 准备等体积 PBS 含 25～100 μg 抗原和弗氏完全佐剂的乳化液（200～400 μl/鼠）。用双头带塞的连接器连接两个注射器，一个注射器装抗原，另一个装佐剂。来回推压注射器，使得其内容物从一侧到另一侧注射器，推压 5～10 min 直到得到稳定的乳化液。2. 用 22－G 的针给小鼠腹腔注射（每一个抗原 3～5 只小鼠）。3. 3 周后，用等体积的含 10～50 μg 抗原的 PBS

备择方案用电泳分离的抗原进行免疫

1. 将含 10～50 μg 目的蛋白抗原的蛋白质混合物上样于适当的 SDS 变性分离胶并电泳。2. 将胶浸泡在冷的 0.1 mol/L 的 KCl 中 5～15 min。蛋白质条带会在透明凝胶的背景下出现白色沉淀。用解剖刀或剃须刀切下合适的条带。3. 在组织研磨机中用最小量的 PBS 研磨凝胶条带。确定连续加入 100 μl 直至研碎的凝胶条带成为液体所需的最小体积。4. 用包含 10～25μl