原理
材料与仪器
任意品系小鼠 6～8 周
冷的 0.1 mol L KCl PBS 抗原 完全和不完全弗氏佐剂
组织研磨机 22－G 注射针头 带塞的 3 ml 注射器 双头带塞的连接器 无菌剪刀 剃须刀片 解剖刀片 木制涂棒
冷的 0.1 mol L KCl PBS 抗原 完全和不完全弗氏佐剂
组织研磨机 22－G 注射针头 带塞的 3 ml 注射器 双头带塞的连接器 无菌剪刀 剃须刀片 解剖刀片 木制涂棒
步骤
1. 将含 10～50 μg 目的蛋白抗原的蛋白质混合物上样于适当的 SDS 变性分离胶并电泳。
2. 将胶浸泡在冷的 0.1 mol/L 的 KCl 中 5～15 min。蛋白质条带会在透明凝胶的背景下出现白色沉淀。用解剖刀或剃须刀切下合适的条带。
3. 在组织研磨机中用最小量的 PBS 研磨凝胶条带。确定连续加入 100 μl 直至研碎的凝胶条带成为液体所需的最小体积。
4. 用包含 10～25μl 抗原的凝胶悬液 200～400 μl 腹腔注射免疫小鼠。
5. 3 周后用包含 10～25μl 抗原的凝胶悬液 200～400μl 腹腔注射强化免疫小鼠。
6. 采血，测定抗体滴度，进行细胞融合试验（见基本方案步骤 4～8）。
注意事项
重复用聚丙烯凝胶免疫小鼠会导致黏附，增加了分离脾脏的难度。
来源：丁香实验
