免疫荧光染色（IF）

通过使用激发波长及发射波长均不相间的荧光染料而进行的。通常限用两种荧光染料，最常见的是罗丹明（绿光激发，发射红光）和荧光素（蓝光激发、发绿光）联合使用。

1. 在培养皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液，收获细胞。此程序比通常的胰蛋白酶消化时间长。4℃ 1000 g 离心 5 分钟。操作始终在冰上进行。 2. 用 4 ml PBS+0.1% 叠氮化钠和 1% BSA 或热的灭活血清洗细胞。 3. 计数细胞，每个样品的最小浓度为 1X106/ml。 4. 将样品等分为 50 μl 小体积的含 0.1

小鼠尾部皮肤的表皮毛囊全标本（whole mount）的免疫荧光染色实验的基本过程可分为如下几步：A. 将表皮毛囊全标本取出，放入封闭液（3％ 脱脂奶粉，0.5％ 曲通溶于 PBS），4 ℃ 过夜。B. 加溶于封闭液的一抗，4 ℃ 过夜。C. 用含 0.2％ 吐温的 PBS 洗超过 4 次，每次 1 小时。每次洗的时候轻轻摇动。D. 加溶于封闭液的二抗，4℃ 过夜。E. 用含 0.2％ 吐温的 P

荧光染色法检测支原体污染是利用荧光染料进行支原体污染的拣择方法。荧光染料（Hoechst 33258）是一种能和 DNA 特异结合物质。如果，检测样品为支原体污染，则附在细胞表面的支原体 DNA 着色，在荧光显微镜下可见。

间接免疫荧光染色法是先用已知未标记的一抗与待检测的抗原反应。反应一定时间后，洗去未结合的抗体，再与荧光素标记的二抗反应。根据所测定的荧光强度和阳性百分率可以得到相应抗原的密度和分布的比例。

1. 冰冻切片一般选择多聚赖氨酸黏附性载玻片，多聚赖氨酸处理载玻片是带强阳离子的，主要用于病理组织切片、液基细胞学涂片,作用是防止玻片掉片。冰冻切片之后如果不即时染色，可将片子放于负八十冰箱。再次取出后可先在室温晾干 15 分钟。然后置 PBS 中浸泡 10 分钟，以去除 OCT；2. 用组化油笔将待染组织圈好，目的是为了在进行后续孵育抗体时尽量缩小范围，使抗体进行有效的孵育；3. 0.5%Tri

免疫荧光主要判断目的蛋白的定位，实验过程中会染表征细胞核的 DAPI。拿到免疫荧光结果，使用 PS 等软件进行 merge，如果染色结果只在 DAPI（蓝色）周围有一圈，即细胞膜定位；如果染色结果显示 DAPI 周围到处都有，即胞浆定位；如果染色结果和 DAPI 完全 merge，即细胞核定位。定量化细胞骨架：点击 Image → Type → 8-bit 可以二值化图像转换成黑白，分析骨架 An

1. 在培养皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液，轻摇，收获细胞。4℃ 1000 g 离心 5 分钟。 2. 用 4 ml PBS+0.1% 叠氮化钠和 1% BSA 或热的灭活血清洗细胞。 3. 计数细胞，每个样品的最小浓度为 1X106/ml。 4. 将样品等分为 50 μl 小体积的含 0.1% 叠氮化钠和 1% 热的灭活血清或 1% 的

免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位，检测出抗原或抗体。此实验方案介绍了一种经三步反应的技术，它通过使用链亲和素-第二抗体结合物，然后再与生物素-荧光染料结合物反应，提高了免疫组化反应的敏感度。

在进行细胞免疫荧光过程中，需要用到细胞爬片，通过将爬片浸在细胞培养基内，细胞在爬片上生长，进而进行细胞的免疫荧光。

免疫荧光技术是指将抗原抗体反应和荧光标记技术联合使用以鉴定阳性杂交瘤细胞株的方法。

免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位，检测出抗原或抗体。

直接免疫荧光染色法是荧光染色最简单、最基本的方法。

免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术（比如流式细胞仪）测定含量。

免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及定量（荧光面积或平均荧光强度等）。

免疫荧光通过抗体与示踪物质结合，利用抗原-抗体结合反应，进而对抗原所在的细胞或组织进行定性或定量。免疫荧光与免疫细胞化学比较方法优点缺点免疫荧光步骤较简单，可同时标记多种蛋白，图片伪彩色观赏性强荧光容易淬灭，样品保存时间不长免疫细胞化学样品适合长期保存步骤繁琐，一次只能标记一种蛋白

若在同一标本中有A和B两种抗原需要同时显示，A抗原的抗体用FITC标记，B抗原的抗体用TRITC标记，可采用免疫荧光细胞化学双重染色法。