简介
荧光染色法检测支原体污染是利用荧光染料进行支原体污染的拣择方法。荧光染料（Hoechst 33258）是一种能和 DNA 特异结合物质。如果，检测样品为支原体污染，则附在细胞表面的支原体 DNA 着色，在荧光显微镜下可见。
原理
荧光染色法检测支原体污染的基本原理用特异荧光染料（Hoechst 33258）染色后在荧光显微镜下进行检测。荧光染料（Hoechst 33258）是一种能和 DNA 特异结合物质。如果，检测样品为支原体污染，则附在细胞表面的支原体 DNA 着色，在荧光显微镜下可见。
材料与仪器
器材：
① DMEM 完全培养基及无抗生素的 DMEM 培养基
② 二苯甲酰胺荧光染料（Hoechst 33258）
③ 固定液
④ 细胞培养 6 孔板或其他容器
⑤ 荧光显微镜
⑥ 二氧化碳培养箱
步骤
荧光染色法检测支原体污染的基本过程可分为以下几步:
A. 盖玻片培养细胞汇合前从瓶中取出；细胞最好处于 70％ 汇合，如细胞完全汇合，能影响支原体的观察。
B. 漂洗将细胞盖片置于培养皿中，用不含酚红的 Hanks 液漂洗；细胞悬液则先离心去上清营养液后，再加入 Hanks 液漂洗。
C. 固定加入固定液 5 ml，放置 10 min。
D. 漂洗用生理盐水或去离子水漂洗，方法同（2）。
E. 染色加入二苯甲酰胺荧光染料（Hoechst 33258）工作液 5 ml，在室温下放置 10 min。
F. 观察取出盖玻片空气中干燥，细胞面向上，滴加 pH5.5 的磷酸缓冲液数滴，覆以盖玻片，在荧光显微镜下观察。
注意事项
1. 盖玻片培养细胞达到 70% 汇合观察效果最佳，不要使细胞完全汇合。
2. 在空气中干燥时，盖玻片的细胞面向上。
来源：丁香实验
