细胞培养中支原体污染的检测实验

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

支原体污染是细胞培养实验中微生物污染的一种，支原体对细胞的直接影响在于，细胞被支原体污染后，增殖缓慢，部分细胞变圆，从瓶壁上脱落。部分细胞虽然表面变化不十分明显，实际上潜伏着多方面的危险。支原体可以通过消耗培养基中的精氨酸，抑制细胞 DNA、RNA 的合成，降低细胞的抵抗力。因此，支原体污染对细胞的影响是非常广泛和深远的。目前，用于细胞培养中支原体污染的检测方法主要有：培养法、荧光染色法、PCR 法和电镜观察法。

原理

培养法检测支原体污染的基本原理是利用营养丰富的培养基，直接对待检细胞、血清等进行支原体培养后进行检测。

荧光染色法检测支原体污染的基本原理用特异荧光染料（Hoechst 33258）染色后在荧光显微镜下进行检测。荧光染料（Hoechst 33258）是一种能和 DNA 特异结合物质。如果，检测样品为支原体污染，则附在细胞表面的支原体 DNA 着色，在荧光显微镜下可见。

PCR 法检测支原体污染基本原理是酶促 DNA 合成反应，即在 DNA 模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经 DNA 聚合酶的作用，使 DNA 链扩增延伸。

电镜观察法检测支原体污染的基本原理是利用电子显微镜的超级放大功能，可直接观察培养细胞中支原体污染情况。

来源：丁香实验团队

操作方法

培养法检测支原体污染

培养法检测支原体污染是一种可靠且成本低廉的方法，但培养周期较长，常用于细胞以及临床治疗细胞的支原体检查。

荧光染色法检测支原体污染

荧光染色法检测支原体污染是利用荧光染料进行支原体污染的拣择方法。荧光染料（Hoechst 33258）是一种能和 DNA 特异结合物质。如果，检测样品为支原体污染，则附在细胞表面的支原体 DNA 着色，在荧光显微镜下可见。

PCR法检测支原体污染

PCR 法检测支原体污染是 20 世纪 80 年代中期建立起来的一种体外 DNA 扩增实验，其该实验具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，但其对实验环境的要求严格，实验成本较高，有时还有假阳性的现象出现。

电镜法检测支原体污染

电镜法检测支原体污染是一种利用电子显微镜观察培养细胞中支原体污染情况的方法。