支原体污染以及检测

支原体代谢需固醇类物质、部分种类需要精氨酸、O2或葡萄糖，每一种支原体都有自身持点。多数支原体适合于偏碱条件下生存(pH7.6-8.0)，对酸耐受性差。对热比较敏感，对一般抗生素不敏感。

支原体污染细胞后，培养液可不发生混浊。多数情况下细胞病理变化轻微或不显著，细微变化也可由于传代、换液而缓解。因此易被忽视。但个别严重者，可致细胞增殖缓慢。甚至从培养器皿脱落。

为确定有无支原体污染可做如下检酗：

①相差显微境检测：将细胞按种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上，24 h后取出，用相差油镜观察．支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。

②荧光染色法：荧光染色用能与DNA特异性结合的荧光染料Hoechst 33258，可使支原体内含有的DNA着色，染色后用荧光显微镜观察。具体方法如下：首先将细胞接种盖玻片上，在细胞未长满前取出玻片，用不合酚红的Hanks液漂洗一下，用1: 3醋酸甲酵固定10 min，然后用生理盐水漂洗．置于用生理盐水配浓度为50 pg/ml的Hoechst 33258中染色10 min。染色后用蒸溜水洗1-2 min．向细胞面滴加pH5.5磷酸缓冲液数滴，然后置荧光显微镜下观察。镜下支原体为散在于细胞同围或附于细胞膜表面的亮绿色小点。

③电镜检查；用扫描电镜方法简便快速．也可以利用透射电镜。

④DNA分子条文检查或支原体培养等方法：检出率高．但方法较为复杂。