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细胞培养箱内存在支原体污染,怎么能完全彻底消除净支原体污染?
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来一起探讨
首先要对培养箱进行消毒,可以通过高压灭菌,或是使用70%酒精等对其进行消毒后紫外杀菌。同时在培养细胞前,可以先进行预培养,若不存在污染则接着进行实验,还可以在细胞培养过程中在加入抗生素,防止污染。
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首先应该清除污染的细胞,或者是在细胞培养基中添加支原体去除剂。然后还有支原体去除剂的喷雾,可以再消毒培养箱的时候喷洒一下。
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可以使用支原体清除剂 及干雾过氧化氢灭菌设备进行清除。
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对环境及培养基完全彻底消毒,高压灭菌,紫外线照射,氯制剂擦拭
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使用支原体清除培养基,每2~3天更换1次新鲜培养液,换液时用无菌的pingheng盐溶液洗涤细胞1~2次;期间如果细胞密度过大,请保持细胞密度适当(贴壁细胞可能需要用胰酶消化),并更换新的培养器皿,3天之后,即可见明显清除效果;处理15天后,可以用支原体检测试剂盒进行检测,检测支原体是否杀灭完全;如果仍有支原体残留,可以考虑再处理6天;为避免细胞再次受到“支原体"的污染,以后每隔1个月进行支原体的常规检测,以保证没有新的支原体污染。
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培养箱检测到污染,建议高压灭菌培养箱,更换无支原体污染的培养箱。然而,没有无支原体的培养箱可用时,从被侵染的细胞中清除支原体就势在必行。支原体清除方法主要有四种:(a)物理方法,比如热激和光敏;(b)化学方法,比如用氯仿清洗,或者用含6-MPDR的培养基培养;(c)免疫方法,用特异性抗支原体抗体的血清;(d)化学疗法,比如在标准培养基或者琼脂糖培养基上加入抗生素。
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培养箱做彻底的清洗,酒精、84消毒,紫外照射。
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以下是常见的几种消除支原体污染的方法:
使用消毒液:将细胞培养箱和相关器具进行高温高压消毒或使用消毒液消毒。常见的消毒液有70%乙醇、过氧化氢、氯仿等。
支原体特异性药物处理:使用抗支原体药物,如新霉素、阿奇霉素等,在细胞培养基中加入药物,培养一段时间后取样观察是否消除了支原体污染。需要注意的是,抗生素治疗应该在无菌条件下进行,否则可能引入新的细菌或病毒感染。
换细胞株:将被支原体污染的细胞株进行处理,包括使用支原体特异性药物和检测支原体污染,如果不能消除支原体污染,就需要更换新的细胞株。
吸附剂去除:利用支原体吸附剂,如聚二甲基硅氧烷(PDMS)、聚丙烯酸等,在细胞培养基中加入吸附剂,将支原体吸附在吸附剂表面,从而实现净化。