细胞实验我要加一种通路抑制剂，如何确定通路抑制剂的浓度和作用时间？是IC50吗？（查文献只有个参考范围，如何精准确定浓度)

1楼，想请教一下，为什么一开始用5-10倍的IC50的量，谢谢～

抑制剂的使用量受多种因素影响，包括抑制对象的可接触性，细胞通透性，孵育时间，细胞种类等等。我们建议通过检索文献确定使用抑制剂的起始浓度。如果有报道的K i 值或IC 50值，可以采用其5-10倍的量开始尝试以达到抑制酶活性的最佳效果。如果抑制剂的K i 值或IC 50值未知，则需要在更广泛的范围尝试抑制剂的使用浓度，并采用Michaelis-Menten动力学计算K i 值。采用高浓度抑制剂而没有抑制效果，甚至得到相反的结果等情况并不罕见。最好设立溶解抑制剂所采用的溶剂作为对照，以排除溶剂的非特异性影响。

一般是根据说明书或者文献的参考浓度设置一个梯度，然后做CCK8计算IC50

参考文献的浓度和时间增加4-5个时间点和浓度

对细胞实验添加通路抑制剂确定最佳浓度和作用时间,可以考虑以下几点:

1. 进行预实验,设置多个梯度浓度(如10uM, 20uM, 50uM等),观察不同浓度下的抑制效果,确定出一个有效的浓度范围。

2. 在有效浓度范围内,设定更小间隔的几个浓度(如15uM, 25uM, 35uM等),确定出最佳浓度。

3. 进行时间Gradient实验,分别在最佳浓度下,作用不同时间(如1h,2h,4h等),观察时间对抑制效果的影响,确定最佳作用时间。

4. 最后,在最佳浓度和最佳时间条件下重复实验,确保结果可靠。

需要注意的是,文献报道的浓度范围仅供参考,最佳参数需要根据自己的细胞和实验系统来确定。预实验和梯度设计非常必要。希望这些思路可以提供一些帮助。

在细胞实验中，确定通路抑制剂的浓度和作用时间，通常需要综合考虑抑制剂的活性、细胞类型、实验目的等因素。以下是一些建议：

1. 参考IC50值：IC50值是指在药物浓度-反应曲线上能够抑制50%细胞活性的浓度。这是一个常用的衡量抑制剂活性的参数。你IC50值可以作为参考，但并不一定适用于所有实验情况，因为不同的细胞类型和实验条件可能会导致不同的IC50值。将IC50值作为初始参考浓度，然后根据实验目的和细胞类型进行优化。

2. 实验优化：在确定了初始浓度后，可以通过实验进一步优化抑制剂的浓度。可以从较低的浓度开始，逐渐增加浓度，以找到对细胞生长、凋亡等指标产生显著影响的最佳浓度。同时，可以设置溶剂对照组以评估抑制剂的效应。

3. 作用时间：抑制剂的作用时间取决于实验目的和细胞类型。通常，可以设置24-72小时的作用时间，以评估抑制剂对细胞生长、凋亡和信号通路的影响。如果实验目的侧重于急性效应，可以选择较短的作用时间（如几小时）；如果实验目的侧重于长期效应，可以选择较长的作用时间（如数天甚至数周）。

4. 多次重复：为了确保实验结果的稳定性和可重复性，建议进行多次重复实验，并对结果进行统计学分析。

根据实验目的、抑制剂的半衰期和作用时间来确定具体的实验方法。常见的有两种:一是将细胞先采用抑制剂预处理一段时间（具体时间参考说明书或者文献报道），然后加入实验用药物处理。这种方式适合实验时间较短的情况，最好是在抑制剂的有效作用时间内完成实验。二是将抑制剂和药物同时加入细胞中（也可以先用抑制剂预处理细胞，然后同时加药），适合较长时间；如果观测时间较长，实验中间需要换液加入新的抑制剂和药物。

确定剂量:准备溶液,通常是以DMSO或PBS为溶剂,并根据已有文献以及实验需求确定适当的抑制剂浓度和剂量。