原理
免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位，检测出抗原或抗体。
材料与仪器
悬浮细胞
多聚-L-赖氨酸
离心机 培养箱
多聚-L-赖氨酸
离心机 培养箱
步骤
1. 细胞在冰浴中冷却，然后用台式离心机于4℃以800 g 离心5 min，吸去培养液并以4℃PBS重悬细胞。
2. 离心吸去PBS，以1~2 ml 2%PFA固定液，或2%PFA固定液/0.1% Triton X-100重悬细胞，置冰上固定30 min。
3. 离心、吸去固定液，用15 ml 4℃ PBS重悬细胞，放5 min 后，用PBS再次洗涤细胞。
4. 稀释的第一抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min，250 μl 抗体足够用于5x106细胞。
5. 离心细胞，吸去PBS，重悬细胞于第一抗体中，置4℃温育1 h。
6. 用4℃ PBS稀释细胞和抗体至15 ml。
7. 离心，吸去PBS，以4℃ PBS重悬细胞，重复1次。
8. 第二抗体4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min，5x106细胞用250 ul 抗体足够。
9. 吸去PBS，以第二抗体重悬细胞，4℃温育1 h，重复步骤6及步骤7。
10. 除非立即观察细胞，否则在进行细胞浓缩的下一步操作之前应以铝萡包裹离心管并冷藏。
9. 吸去PBS，以第二抗体重悬细胞，4℃温育1 h，重复步骤6及步骤7。
10. 除非立即观察细胞，否则在进行细胞浓缩的下一步操作之前应以铝萡包裹离心管并冷藏。
11. 离心细胞并以少量PBS重悬（勿用水），将细胞悬液滴于多聚-L-赖氨酸覆层的载玻片上，加上盖玻片，尽可能马上观察结果。
注意事项
1、荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，时间过长，可能会使荧光提前衰退。
2、每次试验均需设置以下三种对照：
(1) 阳性对照：阳性血清+荧光标记物;
(2) 阴性对照：阴性血清+荧光标记物;
(3) 荧光标记物对照：PBS+荧光标记物。
来源：丁香实验
