细菌定量荧光标记实验，加入钙黄绿素后直接发荧光，而不是等到细菌生长之后再发荧光来较快的提示细菌有没有生长，怎么调整实验？

检查一下，是不是步骤有不对的地方？

钙黄绿素染色步骤

1、用DMSO制备1 mM 的钙黄绿素溶液，并用PBS将其稀释制成1～50 μM的钙黄绿素溶液。

2、将1/10细胞培养基体积的钙黄绿素溶液加入到细胞培养基中。

3、在37℃培养细胞15-30分钟。

4、用PBS或适当的缓冲液洗涤细胞两次。

5、用490 nm激发波长，515 nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。

a、如果钙黄绿素溶液很难进入细胞，可以使用表面活性剂，如Pluronic F127。

b、或者您也可以用1/10浓度的Calcein-AM溶液代替培养基。