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免疫荧光标记技术

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免疫标记技术(immunolabelling techniques)是使用荧光素、酶、放射性核素、铁蛋白、胶体金及化学(或生物)发光剂等作为示踪物,对抗原或抗体标记后进行的抗原抗体反应;并借助于荧光显微镜、酶标检测仪、射线测定仪等精密仪器,对实验结果直接镜检观察或进行自动化测定,可以在细胞、亚细胞及分子水平上,对抗原抗体反应进行定性或定位研究;或应用各种液相和固相免疫分析方法,对体液中的半抗原、抗原或抗体进行定性和定量测定。

因此,免疫标记技术在敏感性、特异性、精确性以及应用范围等方面远远超过一般免疫血清学方法。

根据实验中所用标记物和检测方法不同,免疫标记技术分为免疫荧光技术放射免疫分析、免疫酶技术、发光免疫分析技术和免疫电镜技术。

免疫荧光标记技术(immunofluorescence technique)始创于20世纪40年代初,1942年Coons等首次报道用异氰酸荧光素标记抗体,检查小鼠组织切片中的可溶性肺炎球菌多糖抗原。

当时由于异氰酸荧光素标记物的性能较差,未能推广使用。直至1958年Riggs等合成了性能较为优良的异硫氰酸荧光黄(fluorescein isothiocyanate,FITC)。Marshall等又对荧光抗体标记的方法进行了改进,从而使免疫荧光技术逐渐推广应用。半个多世纪以来,经过许多学者不断改进和发展,使此项技术成为微生物学、免疫学、病理学及免疫组织化学中常用的一种免疫学实验方法。

免疫荧光技术的基本原理是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显微示踪的精确性相结合。以荧光素作为标记物,与已知的抗体(或抗原,但较少用)结合,但不影响起免疫学特性。然后将荧光素标记的抗体作为标准试剂,用于检测和鉴定未知的抗原。在荧光显微镜下,可以直接观察呈特异荧光的抗原抗体复合物及其存在部位

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