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在酶扩大免疫测定技术中,半抗原与酶结合成酶标半抗原,保留半抗原和酶的生物活性,当酶标半抗原与抗体结合后,半抗原分子上的酶蛋白与抗体密切接触,使酶的活性中心受到影响,酶的活性受到抑制。测定时标本中的半抗原、酶标半抗原与抗体竞争性结合,标本中的半抗原含量越高,加底物后其OD值越高。所以放大的是荧光信号。
荧光标记技术并没有放大信号,所以不能叫放大技术。
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一般来说,在酶促反应中,受体受到外界的信号刺激(化学活物理)与细胞膜上的G蛋白结合(G蛋白将细胞外的第一信使肾上腺素等激素和细胞内的腺苷酸环化酶催化的腺苷酸环化生成的第二信使cAMP联系起来),激酶被活化,激酶又使一些酶(别构酶)活性增加或者由无活性变成有活性。使细胞产生相应的反应。
所谓的级联放大反应,就是说细胞通过酶事一个微小的信号通过一级一级的酶效果放大。
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EMIT的基本原理是半抗原与酶结合成酶标半抗原,保留半抗原和酶的活性。当酶标半抗原与抗体结合后,所标的酶与抗体密切接触,使酶的活性中心受影响而活性被抑制。反应后酶活力大小与标本中的半抗原量呈一定的比例,从酶活力的测定结果就可推算出标本中半抗原的量。
原始标记酶催化附加一个反应系统,如酶底物反应循环或酶级联反应,从而达到反应放大的目的。这种由数个催化反应的耦联而构建的放大系统,是酶放大的根本之所在,敏感性的提高来源于真正的信号放大,而不是简单地将一个分子转变为更多的易于测定的分子。
免疫荧光一般是直接抗体带了荧光,一般不称作放大反应
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