材料与仪器
细胞
PBS 溶液 叠氮化钠
PBS 溶液 叠氮化钠
步骤
1. 在培养皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液,收获细胞。此程序比通常的胰蛋白酶消化时间长。4℃ 1000 g 离心 5 分钟。操作始终在冰上进行。
2. 用 4 ml PBS+0.1% 叠氮化钠和 1% BSA 或热的灭活血清洗细胞。
3. 计数细胞,每个样品的最小浓度为 1X106/ml。
4. 将样品等分为 50 μl 小体积的含 0.1% 叠氮化钠和 1% 热的灭活血清的 PBS 溶液。
5. 加合适滴度的初始抗体,用系列稀释确定合适滴度范围。
6. 在冰上孵育细胞 30 分钟。
7. 每个样品中加入 4 ml PBS+叠氮化钠和 BSA,轻轻混合。
8. 1000 g 离心细胞 5 分钟。
9. 用 4 ml PBS+叠氮化钠和 BSA 洗样品。
10. 1000 g 离心细胞 5 分钟。
11. 在适当体积的 PBS+叠氮化钠中重悬细胞。
12. 加合适滴度的次级抗体,用与起始滴度相近的范围确定所需量。
13. 在冰上孵育细胞 30 分钟。
14. 每个样品中加入 4 ml PBS+叠氮化钠和 BSA,轻轻混合。
15. 1000 g 离心细胞 5 分钟。
16. 在相近体积的 PBS+叠氮化钠和 BSA 中重悬细胞,终浓度为 1X106~5X106 /ml。
2. 用 4 ml PBS+0.1% 叠氮化钠和 1% BSA 或热的灭活血清洗细胞。
3. 计数细胞,每个样品的最小浓度为 1X106/ml。
4. 将样品等分为 50 μl 小体积的含 0.1% 叠氮化钠和 1% 热的灭活血清的 PBS 溶液。
5. 加合适滴度的初始抗体,用系列稀释确定合适滴度范围。
6. 在冰上孵育细胞 30 分钟。
7. 每个样品中加入 4 ml PBS+叠氮化钠和 BSA,轻轻混合。
8. 1000 g 离心细胞 5 分钟。
9. 用 4 ml PBS+叠氮化钠和 BSA 洗样品。
10. 1000 g 离心细胞 5 分钟。
11. 在适当体积的 PBS+叠氮化钠中重悬细胞。
12. 加合适滴度的次级抗体,用与起始滴度相近的范围确定所需量。
13. 在冰上孵育细胞 30 分钟。
14. 每个样品中加入 4 ml PBS+叠氮化钠和 BSA,轻轻混合。
15. 1000 g 离心细胞 5 分钟。
16. 在相近体积的 PBS+叠氮化钠和 BSA 中重悬细胞,终浓度为 1X106~5X106 /ml。
来源:丁香实验