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活细胞表面抗原的荧光染色(间接免疫荧光)

相关实验:流式细胞计量术(基于荧光的蛋白质分析)实验

最新修订时间:

材料与仪器

细胞
PBS 溶液 叠氮化钠

步骤

1. 在培养皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液,收获细胞。此程序比通常的胰蛋白酶消化时间长。4℃ 1000 g 离心 5 分钟。操作始终在冰上进行。

2. 用 4 ml PBS+0.1% 叠氮化钠和 1% BSA 或热的灭活血清洗细胞。

3. 计数细胞,每个样品的最小浓度为 1X106/ml。

4. 将样品等分为 50 μl 小体积的含 0.1% 叠氮化钠和 1% 热的灭活血清的 PBS 溶液。

5. 加合适滴度的初始抗体,用系列稀释确定合适滴度范围。

6. 在冰上孵育细胞 30 分钟。

7. 每个样品中加入 4 ml PBS+叠氮化钠和 BSA,轻轻混合。

8. 1000 g 离心细胞 5 分钟。

9. 用 4 ml PBS+叠氮化钠和 BSA 洗样品。

10. 1000 g 离心细胞 5 分钟。

11. 在适当体积的 PBS+叠氮化钠中重悬细胞。

12. 加合适滴度的次级抗体,用与起始滴度相近的范围确定所需量。

13. 在冰上孵育细胞 30 分钟。

14. 每个样品中加入 4 ml PBS+叠氮化钠和 BSA,轻轻混合。

15. 1000 g 离心细胞 5 分钟。

16. 在相近体积的 PBS+叠氮化钠和 BSA 中重悬细胞,终浓度为 1X106~5X106 /ml。

来源:丁香实验

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