细胞表面抗原的检测-间接免疫荧光法

试剂

1. 一抗和荧光标记的二抗

2. 固定液：如4%多聚甲醛、乙醇等。

3. 洗涤液及抗体稀释液(pH 7.4 PBS-Tween 20)

操作方法

1. 取已固定好的细胞爬片或甩片或经过预处理的组织切片（石蜡或冰冻切片）；

2. 加入25ml一抗，完全盖住盖玻片，室温孵育60min；注意不可使盖玻片接触培养板孔边缘。每个检测应包括3组对照：与一抗同一种属、类型的无关抗体组，以检测染色的特异性；未加一抗的对照组，以检测二抗染色的背景；如果可能，用已知阳性样品作为阳性对照组。

3. 加入标记FITC标记的抗抗体（二抗）25ml，室温孵育20min；标记二抗在使用前，应预试其合适的稀释度；

4. 用洗涤液洗3次，各5min；

5. 在一干净和作好标记的载玻片上滴一滴封固液（约50ml）。用一尖头镊子将盖玻片取出。将盖玻片边缘置于一干净纸巾上蘸干液体。翻转盖玻片，使细胞面朝下，置于封固液上，慢慢放下盖玻片，与载玻片相邻与封固液的一端接触，然后使盖玻片置于封固液上，这样可赶出气泡。在观察前空气干燥30min；

6. 在荧光显微镜下观察、拍照。