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科研学霸天团,48小时有问必答
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THP1如何敲除基因?
loveliufudan
可以按照以下步骤进行: 1. 设计目标基因敲除的CRISPR/Cas9方案:确定你要敲除的基因,并设计CRISPR引导RNA(sgRNA)序列,用来帮助Cas9酶在特定位点切割目标基因。 2. 验证和合成sgRNA:合成设计好的sgRNA序列,并检验它在体外是否能够成功引导Cas9切割目标基因。这样可以确保sgRNA能够准确地与目标基因配对。 3. 构建载体:制作CRISPR/Cas9载体,一般是
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问
细胞有霉菌污染应该用什么样的抗生素呢?
huarenqiang5
细胞有霉菌污染可以用两性霉素B、制霉菌素等。
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问
纳米金抗体可以用pbs稀释吗?
sswei
PBS可以用于纳米金抗体稀释。
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问
细胞实验中,在培养基中加入HEPES有什么好处?
huarenqiang5
HEPES溶液是一种弱酸,主要作用是防止培养基pH迅速变动。在开放式培养条件下,观察细胞时培养基脱离了5%CO2的环境,CO2气体迅速逸出,pH迅速升高,若加了HEPES,此时可以维持pH7.0左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES。
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问
细胞实验中,培养基保存在4℃冰箱中,颜色偏暗呈碱性,可能是什么原因?
二五八万仔
培养基使用时间长了之后,剩下的培养基比较少的时候,颜色会偏紫色,属于正常现象
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问
细胞培养实验中,培养液需要加双抗吗,是必须的吗?
大草原的小灰驴
不是必须的,加双抗是为了防止污染细胞,注意无菌操作和培养条件也能在一定程度上避免污染。而且双抗也不是能避免支原体和真菌的污染。
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问
细胞实验中,血清出现沉淀该怎么去除?
是TTT
可以离心去除,也可以用过滤器过滤一下
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问
在细胞培养实验中,如何才能避免血清中沉淀物的出现?
是TTT
血清从前-20℃拿出来以后需要放到4℃融解,同时需要适度摇晃均匀,这样可以有效减少沉淀物
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问
细胞提取蛋白的方法?
是TTT
先加裂解液,裂解完以后再刮取细胞到ep管里面,这样更科学
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问
为什么BV2细胞总是极化?
是TTT
你传代太稀了,按1:2~1:4传代,并且两天更换一次培基可以减少极化现象产生
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问
器官芯片中细胞几乎消失是接种密度太稀了吗?
是TTT
确实是接种密度太稀了,而且最好在细胞生长状态好长势喜人,也就是对数生长期时接种
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问
细胞旁有黑点但培养基不浑浊是什么污染呢?
是TTT
支原体污染看不到,只是细胞会生长缓慢,并且漂浮很多黑胶虫污染可以看到,甚至可以看到游动,考虑后者可能性大
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问
细胞如何解冻才能不被破坏???
是TTT
解冻需要快速,细胞从-80℃冰箱或者液氮罐中取出以后迅速放到水浴箱,水浴箱需要先均匀加热到37℃,按照冻存液的多少,解冻时间控制在1-2分钟,解冻过程缓慢晃动冻存管,使受热均匀
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问
细胞转染效率低,鱼类细胞转染效率更低,怎么解决?
是TTT
转染效率与质粒质量相关:质粒需要无肉毒素,否则影响细胞生长。转染时细胞状态要好,密度处于50%左右为佳。转染时,需要用无血清培基稀释质粒和转染试剂,以防血清影响转染效率
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问
SHSY-5Y细胞如何减少聚团?
是TTT
调整消化时间:细胞一旦在显微镜下消化成圆球状 立即终止消化,切勿过度现有细胞立即消化下来,重新混匀细胞,在镜下观察到细胞均匀单个分散为止调整传代比例,如果细胞仍旧成团,那么增加传代比例
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问
llc细胞怎么也养不活
sswei
推荐使用DMEM培养基,培养基容易变黄,密度过高细胞易死亡。
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问
培养AML12细胞,传代两天后变成了这个样子,请问各位大神这是污染了吗😭,第一张是低倍镜,第二张是高倍镜的
sswei
镜下看培养液变黄,细胞聚团死亡,污染严重。这种情况下应该更换新的重新培养。
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问
求问培养神经元细胞系的培养基只能用Neurobasal嘛,可以用DMEM/F12吗?
王琼33
看你培养什么神经元,我培养的外周神经系统DRG神经元,用的DMEM培养基
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问
急!!求助各位大佬293细胞系表达什么膜蛋白啊,ck7表达吗?
是TTT
293表达的膜蛋白有G蛋白耦联受体,也表达ck7
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问
LPS诱导细胞炎症模型,必须是细胞培养级的LPS吗?
毛利小五郎的徒弟
最好是细胞培养级lps,级别不够容易导致诱导失败,不建议用
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