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血清从前-20℃拿出来以后需要放到4℃融解,同时需要适度摇晃均匀,这样可以有效减少沉淀物
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1. 避免过度搅拌:在加入血清时,尽量避免过度搅拌,以减少气泡的产生和血清蛋白的破坏,从而降低血清沉淀的形成。
2. 保持温度恒定:在进行细胞培养时,应保持培养条件的恒定,如恒温、恒湿和恒氧等,避免环境因素的变化引起血清沉淀。
3. 避免超过有效期:在使用血清时,应注意其有效期,避免使用已过期的血清,这样可以减少血清中蛋白质的降解和血清沉淀的形成。
4. 滤过处理:在加入血清时,可以使用0.2微米的滤膜或其他合适的滤器对血清进行滤过处理,以去除较小的颗粒和杂质,减少血清沉淀的形成。
5. 更换培养基:如果实验中经常出现血清沉淀,可以考虑更换新的培养基,或者使用无血清培养基,避免血清沉淀的产生。
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血清要逐步解冻,放4°冰箱里,不要去水浴解冻
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为了尽量避免血清中的沉淀物出现在细胞培养实验中,可以考虑以下措施:
1. 合理储存和使用血清:储存血清时,避免频繁的冻融循环,因为这可能会导致血清中的蛋白质凝集和沉淀。在使用血清前,彻底离心血清样品,将上清液转移到新的管中。避免将悬浮物一起转移到培养基中。
2. 过滤培养基和血清:在使用培养基和血清前,使用0.22微米或更小孔径的滤膜对其进行过滤。这可以有效地去除悬浮物和微粒,以减少沉淀物的产生。
3. 避免剧烈振荡和搅拌:在血清添加到培养基或其他溶液时,避免过度的剧烈振荡或搅拌,因为这可能会增加沉淀物的形成。轻轻混合即可。
4. 使用低沉淀性血清:不同批次的血清可能存在差异,某些血清可能更容易形成沉淀。选择低沉淀性能良好的血清品牌和批次,可以降低沉淀物的出现。
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可避免沉淀的产生:
(1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
(2) 血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
(4) 勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。
(5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
(6) 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
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血清分装保存,解冻后短时间内用完,避免反复多次预热
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可以在加入血清之前用过滤器将沉淀过滤掉,之后使用的过程中不会产生新的沉淀。